RhoC、RhoGDIα在肺癌细胞系中的表达及与侵袭能力的关系

论文摘要

目的Rho家族蛋白是Ras超家族中小分子量G蛋白的成员，RhoC是Rho亚族蛋白之一，通过其下游靶分子促进肌动蛋白微丝骨架的聚合，对细胞运动及肿瘤侵袭和转移发挥重要作用，关于RhoC与肺癌关系尚不清楚。RhoGDI为RhoC的调节因子，曾认为其抑制Rho蛋白的活性。近年来的研究显示RhoGDI对Rho蛋白还可能有激活作用，其在肿瘤的侵袭及进展中办可能发挥双重作用。有研究结果显示RhoGDIβ在不同类型肿瘤的侵袭和转移中发挥两种相反的作用，而RhoGDIα与肿瘤侵袭和转移的关系尚无报道。本实验中，我们通过检测不同侵袭能力肺癌细胞的RhoC、RhoGDIα的mRNA及蛋白表达水平，初步探讨RhoC、RhoGDIα与肺癌转移的关系。材料与方法1、材料与试剂人肺癌细胞系BE1，LH7，A549，A2均由北京医学院惠赠，人支气管上皮细胞HBE购自中南大学湘雅中心实验室，兔抗人RhoC、羊抗人RhoGDIα多克隆抗体购自Santa Cruz生物技术公司，Trizol总RNA提取试剂购自天根（Tiangen）公司，逆转录试剂盒、PCR试剂盒购自大连宝生物（TaKaRa）公司。2、实验方法（1） Westernblot：采用考马斯亮蓝法进行蛋白定量。SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳，转印（恒压50V，2h），一抗4℃孵育过夜，辣根过氧化物酶标记二抗37℃孵育2h，DAB显色。经凝胶成像系统采集，灰度值测定。（2） RT—PCR：TRNzol试剂提取细胞总RNA后，逆转录获得cDNA，均按说明书操作。PCR扩增产物使用1.5％琼脂糖，120V电泳30min，溴化乙啶（EB）染色，凝胶成像系统下观察。（3） Transwell小室体外侵袭实验：微孔滤膜上平铺Matrigel胶，小室下室加含血清的培养液，上室加细胞悬液，常规培养12h，70％L甲醇固定45min，苏木素染色10min，高倍镜下计数膜背面上的穿膜细胞。（4）免疫荧光：细胞爬片，Triton-100打孔，一抗4℃过夜，避光滴加荧光二抗，Hoechst染核，50％甘油封片，荧光显微镜下观察、照像。3、统计学处理应用SPSS for Windowsl 1.5统计分析软件进行数据处理，采用单因素方差分析．P＜0.05为有统计学意义实验结果1、RhoC、RhoGDIα蛋白在肺癌细胞中的表达4种肺癌细胞中RhoC、RhoGDIα蛋白的表达量明显高于与正常人支气管上皮细胞；高侵袭能力肺巨细胞癌细胞BE1的RhoC、RhoGDIα蛋白表达量明显高于低侵袭能力肺巨细胞癌细胞LH7。在BE1、LH7细胞胞浆内均可检测到RhoC及RhoGDIα蛋白的表达。2、RhoC、RhoGDIαmRNA在肺癌细胞中的表达高侵袭能力肺巨细胞癌细胞BE1的RhoC、RhoGDIα的mRNA表达量高于低侵袭能力肺巨细胞癌细胞LH7。3．Transwell小室对癌细胞侵袭力的测定BE1细胞的体外侵袭力明显高于LH7细胞。结论1、RhoC、RhoGDIα在肺癌细胞中表达高于正常人支气管上皮细胞。2、RhoC、RhoGDIα的表达与肺癌细胞的体外侵袭能力相关。

论文目录

• 一、摘要
• 中文论著摘要
• 英文论著摘要
• 二、英文缩略语
• 三、论文
• 前言
• 材料与方法
• 实验结果
• 讨论
• 结论
• 四、本研究的创新性的自我评价
• 五、参考文献
• 六、附录
• 综述
• 致谢
• 个人简介