ABCG2、ABCB1、LRP在食管癌中的表达及青蒿琥酯联合阿霉素抗食管癌作用机制

论文摘要

目的:通过检测ABCG2、ABCB1、LRP在食管鳞癌中的表达,以及青蒿琥酯联合阿霉素对食管癌Ec9706细胞株的生长及凋亡的影响,探讨食管鳞癌的多药耐药机制及青蒿琥酯联合阿霉素抗食管鳞癌的作用机制,为食管鳞癌治疗提供新的思路及实验依据。方法:1 ABCG2、ABCB1、LRP在食管鳞癌、不典型增生组织、正常食管粘膜组织的表达1.1应用免疫组织化学（immunohistochemistry,IHC）S-P法检测ABCG2、ABCB1蛋白在60例食管鳞状细胞癌、不典型增生组织和正常食管粘膜组织中的表达及LRP蛋白在80例食管鳞状细胞癌、正常食管粘膜组织中的表达。1.2应用流式细胞术（Flow Cytometry,FCM）定量检测ABCG2、ABCB1蛋白在60例食管鳞状细胞癌、不典型增生组织和正常食管粘膜组织中的含量。2青蒿琥酯联合阿霉素对食管鳞癌Ec9706细胞株的影响将食管鳞癌Ec9706细胞在37℃,饱和湿度5%CO2的常规条件下培养,待细胞进入对数生长期后用于实验。2.1将Ec9706细胞按药物分组:⑴对照组:生理盐水;⑵青蒿琥酯组:浓度分别为0.01,0.1,1.0μmol/L;⑶阿霉素组:浓度分别为0.02,0.2,2.0ng/μl;⑷青蒿琥酯与阿霉素联合应用组:①青蒿琥酯0.01μmol/L+阿霉素0.02,0.2,2.0ng/μl;②青蒿琥酯0.1μmol/L+阿霉素0.02,0.2,2.0ng/μl;③青蒿琥酯1.0μmol/L+阿霉素0.02,0.2,2.0ng/μl。2.2应用流式细胞术检测以上各组中食管鳞癌Ec9706细胞的凋亡率及阿霉素含量,其中阿霉素含量用平均荧光强度（均道值）表示。2.3应用RT-PCR方法检测食管鳞癌Ec9706细胞中ABCG2的表达量,用Gel proAnalyzer3.1软件分析扩增产物的光密度（opticaldensity, OD）,计算ABCG2 OD值与GAPDH OD值的比值,对ABCG2 mRNA表达强度进行光密度半定量分析。结果:1食管不同病变组织中ABCG2蛋白的表达1.1应用IHC法检测ABCG2蛋白在60例食管鳞癌、不典型增生组织及食管正常粘膜组织中的表达,结果显示:食管正常粘膜中不表达或弱表达,ABCG2蛋白表达阳性率为3.33%;不典型增生组织中ABCG2蛋白表示阳性率为31.67%;食管鳞癌组织中ABCG2蛋白表达阳性率为83.33%。癌组织中ABCG2蛋白表达显著高于食管正常粘膜（P<0.01）。ABCG2蛋白的表达与年龄和性别无显著性差异（P>0.05）,与细胞分化、浸润深度及淋巴结转移有关（P<0.05）。1.2应用FCM法检测ABCG2蛋白在60例食管鳞癌、不典型增生组织及食管正常粘膜组织中的表达,结果显示:ABCG2蛋白在食管鳞癌组织中表达显著高于食管正常粘膜组织（P<0.01）,在食管正常粘膜、不典型增生组织、癌组织之间呈现逐渐增高趋势,与免疫组化法（IHC）所得结果基本一致。2食管不同病变组织中ABCB1蛋白的表达2.1应用IHC法检测ABCB1蛋白在60例食管鳞癌、不典型增生组织及食管正常粘膜组织中的表达,结果显示:食管正常粘膜组织中ABCB1蛋白表达阳性率为6.67%。不典型增生组织中ABCB1蛋白表达阳性率为36.67%。癌组织中ABCB1蛋白表达阳性率为78.33%。癌组织中ABCB1蛋白表示显著高于食管正常粘膜（P <0.01）。ABCB1蛋白的表达与年龄、性别无显著性差异（P>0.05）,与细胞分化、浸润深度和淋巴结转移有关（P<0.05）。2.2应用FCM法检测ABCB1蛋白在60例食管鳞癌、不典型增生组织及食管正常粘膜组织中的表达,结果显示:ABCB1蛋白在食管鳞癌组织中表达显著高于食管正常粘膜组织（P <0.01）,在食管正常粘膜、不典型增生组织、癌组织之间呈现逐渐增高趋势,与免疫组化法（IHC）所得结果基本一致。3食管不同病变组织中LRP蛋白的表达应用IHC法检测LRP蛋白在80例食管鳞状细胞癌、正常粘膜组织中的表达,结果显示:LRP蛋白在癌组织中表达阳性率为55.00%（44/80）。食管正常粘膜组织中LRP蛋白表达阳性率为35.00%（28/80）。癌组织中LRP表达显著高于食管正常粘膜组织（P<0.01）。LRP蛋白的表达与癌组织的分化程度、浸润深度及淋巴结转移无显著性差异（P>0.05）。4阿霉素、青蒿琥酯及两者联合应用对食管鳞癌Ec9706细胞凋亡率的影响阿霉素单独作用24h后,Ec9706细胞的凋亡率与对照组相比显著增高（P<0.05）;青蒿琥酯单独作用24h后,Ec9706细胞的凋亡率与对照组相比差异无显著性（P>0.05）;青蒿琥酯与不同浓度的阿霉素联合作用24h后,Ec9706细胞的凋亡率与单独应用阿霉素组比较显著增高（P <0.01）,且联合用药组Ec9706细胞内阿霉素的含量较阿霉素单独用药组显著升高（P<0.01）。5应用RT-PCR法检测Ec9706细胞ABCG2mRNA的表达及青蒿琥酯对ABCG2mRNA的影响RT-PCR法检测到Ec9706细胞有ABCG2mRNA的表达,并且青蒿琥酯可以降低细胞ABCG2mRNA的表达量。联合用药组细胞ABCG2mRNA的表达较阿霉素单独用药组细胞ABCG2mRNA的表达显著降低（P<0.01）。结论:1 ABCG2、ABCB1蛋白在食管鳞癌组织中的表达显著高于食管正常粘膜组织,且其表达量与食管鳞癌的细胞分化程度、浸润深度及淋巴结转移显著相关,提示其过表达可能参与食管鳞癌的发生以及耐药性的产生。ABCG2可能成为食管鳞癌新的耐药性逆转治疗靶点。2 LRP蛋白在食管鳞癌组织中的表达显著高于食管正常粘膜组织,且其表达量与食管鳞癌的细胞分化程度、浸润深度及淋巴结转移无显著相关,提示其过表达可能参与食管鳞癌的耐药性的产生。3青蒿琥酯联合阿霉素应用使食管癌细胞的凋亡率较单独应用阿霉素明显升高,提示两者在抗食管癌方面具有协同作用。4青蒿琥酯单独应用使食管癌细胞的凋亡率无显著改变,但可使ABCG2mRNA表达下降,提示青蒿琥酯可能通过降低ABCG2基因的转录,进而影响了ABCG2蛋白的合成,减少了抗癌药的泵出,使得抗癌药在癌细胞内聚集,从而提高抗癌药的杀伤癌细胞的作用。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 研究论文 ABCG2 在食管癌中的表达及青蒿琥酯抗食管癌作用机制
• 第一部分 ABCG2、ABCB1、LRP 在食管癌中的表达及其生物学意义
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 附图
• 附表
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 第二部分 青蒿琥酯与阿霉素联合应用抗人食管癌Ec9706 细胞作用机制
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 附图
• 附表
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 综述
• 致谢
• 个人简历