雷那度胺单药或联合硼替佐米对套细胞淋巴瘤体内外增殖及凋亡的影响

论文摘要

套细胞淋巴瘤（MCL）是一种临床治疗具有挑战性的B细胞非霍奇金淋巴瘤（Non-Hodgkin lymphoma,NHL）,约占成人NHL的5-10%。其多在老年人发病,起病隐匿、进展迅速的特点导致患者生存时间仅为34年。尽管近年来高剂量化疗联合干细胞移植的应用使得MCL的治疗总有效率已有所改善,然而反应持续时间短暂和高强度化疗带来的不可避免的高治疗相关死亡率仍是临床医生所面临的巨大挑战,因此探索更为高效低毒的药物联合新策略正成为今后治疗MCL的方向。新型分子靶向药物在临床治疗中已显现出良好的疗效,免疫调节药物雷那度胺（Lenalidomide,LEN）与蛋白酶体抑制剂硼替佐米（Bortezomib,BTZ）作为这一类药物的代表,尽管作用机制还尚未完全明确,但其在治疗恶性血液病中的应用已逐渐被重视及拓展。继2006年雷那度胺被美国FDA批准用于治疗多发性骨髓瘤（Multiple myeloma, MM）后,人们发现雷那度胺治疗NHL同样有效。硼替佐米目前也已是NCCN指南中治疗MCL的二线药物,已有临床试验结果表明硼替佐米单药应用治疗MCL的有效性,然而LEN和BTZ这两个具有不同作用机制的药物联合治疗MCL的临床试验刚刚开始,其治疗的有效性,作用机制等方面的研究尚未见报道。本研究探讨了LEN单药或联合BTZ对MCL细胞的抗肿瘤作用,并试图阐明其可能的作用机制,为今后临床应用LEN为基础的联合治疗MCL提供了有力的临床前期数据。目的:1.研究LEN单药或联合BTZ对体外培养的MCL细胞株Jeko-1细胞的抗增殖、促凋亡作用,并初步探讨其可能的作用机制。2.建立人套细胞淋巴瘤裸鼠模型,观察两种药物对肿瘤增殖的影响。方法:体外培养人MCL细胞株Jeko-1,四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测LEN（10、20、50、100μmol/L）单药作用1-7d, BTZ（2.5、5.0、7.5、10.0nmol/L）单药作用24h、48h,或者二者联合（LEN/BTZ）作用24h、48h后,对Jeko-1细胞的生长抑制情况;倒置显微镜下观察细胞生长状况;流式细胞仪检测细胞周期分布及凋亡情况;半定量RT-PCR法检测Caspase-3、Bcl-2、Noxa、血管内皮生长因子（Vascuoar endothelial growth factor ,VEGF）mRNA的表达情况。将人套细胞淋巴瘤细胞株Jeko-1接种于裸鼠腋窝处皮下,每3d测量肿瘤大小,第5周处死裸鼠。对比不同处理方式下肿瘤生长抑制情况。结果:（1）MTT检测发现LEN作用于Jeko-1细胞后,其生长抑制自第3天后出现,随时间与浓度增加抑制作用逐渐增强。（2）倒置显微镜下可见LEN组细胞生长受抑,密度减低,但未出现明显细胞凋亡或死亡现象。BTZ组与LEN+BTZ组细胞生长稀疏、凋亡及坏死明显。（3）流式细胞仪分析结果表明,与对照组相比,随着LEN浓度的增加与作用时间的延长,处于G0/G1期的细胞百分比逐渐明显增多,但在浓度为100μmol/L的LEN作用至7d时仍不能诱导细胞凋亡;将100μmol/L LEN分别与2.5nmol/L、5.0nmol/L的BTZ联合作用于Jeko-1细胞48h时,较单药BTZ组,LEN+BTZ组细胞出现明显的亚G1峰,并且凋亡呈现叠加效应（P<0.05）。（3）RT-PCR检测发现随着递增浓度的BTZ作用48h后细胞表达Bcl-2、VEGF mRNA量减少,而caspase 3、Noxa mRNA表达量明显增加,而在LEN组,除VEGF mRNA随着LEN作用时间的增加而表达减少外,Caspase-3、Bcl-2、Noxa mRNA并未随LEN浓度和时间的增加而改变;LEN+BTZ组联合作用48h可见VEGF mRNA的表达量明显下降（P<0.05）,而Caspase-3、Bcl-2、Noxa mRNA与单药BTZ组无显著性差异。（4）人套细胞淋巴瘤荷瘤鼠研究中,BTZ组、LEN组、LEN+BTZ联合组在第5周时抑瘤率分别为32.7%、49.3%和58.9%。与对照组相比,LEN/BTZ联合可以明显减缓人套细胞淋巴瘤荷瘤鼠体内肿瘤体积的增长（P<0.05）。结论:1.雷那度胺对Jeko-1细胞具有时间与浓度依赖性生长抑制作用,但其不能诱导Jeko-1细胞发生凋亡;2.雷那度胺与硼替佐米联合可有效抑制Jeko-1细胞增殖并诱导其凋亡;3.雷那度胺单药或与硼替佐米联合对人套细胞淋巴瘤裸鼠模型具有抗肿瘤作用。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 综述
• 参考文献
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