子宫内膜癌中EGFR、NF-KB蛋白表达及EGFR基因突变的研究

论文摘要

研究背景与目的：子宫内膜癌是女性生殖系统最常见的恶性肿瘤之一，尽管目前针对子宫内膜癌的治疗方法和技术不断发展，但对晚期和复发的子宫内膜癌治疗仍为棘手。表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor，EGFR）是一种跨膜受体型酪氨酸激酶，其介导的信号转导通路参与多种肿瘤的发生发展，研究表明[1]，其在子宫内膜癌中有过表达，并且与子宫内膜癌的发生、发展、侵袭等密切相关，是目前研究较多的抗肿瘤药物治疗的新靶点之一，EGFR酪氨酸激酶抑制剂能增强EGFR阳性表达肿瘤细胞的放疗敏感性,且在非小细胞肺癌中酪氨酸激酶抑制剂治疗敏感人群中EGFR突变率较高，其EGFR突变与酪氨酸激酶抑制剂治疗效果具有较密切的相关性，因此在子宫内膜癌中EGFR基因是否存在突变，突变与蛋白表达是否相关，是我们探讨的重点，明确这些关系，对于子宫内膜癌的治疗具有重要意义。NF-kB是最重要的核转录因子之一，参与多种基因调控、机体免疫应答和细胞凋亡的信号传导过程，p50、p65是其中分布最广泛的异源二聚体。研究显示EGFR与NF-kB在鼻咽癌、食管癌等多种肿瘤中表达，并且呈正相关关系[2]，两者在肿瘤的发生发展以及浸润等过程中起着重要的作用，而目前在子宫内膜癌中二者之间的关系国内外尚无研究报道，是否EGFR与NF-kB在子宫内膜癌中同样起着协同作用我们尚且不知，因此研究清楚EGFR与NF-kB在子宫内膜癌中二者之间的关系，对于此类疾病的诊断以及预后评估具有重要的意义。研究内容和方法：1.取江西省肿瘤医院及南昌大学第二附属医院子宫内膜石蜡包埋组织104例，其中正常增生期内膜30例，非典型增生子宫内膜18例，子宫内膜癌56例，采用免疫组化法检测EGFR、NF-kB在各组组织中的表达情况。结果采用x2检验或Fisher确切概率法等相关统计方法进行统计，并结合临床病理资料进行分析。2.取上述56例肿瘤腊块组织、19例子宫内膜癌病人新鲜手术标本为实验组，以同期因阴道出血诊刮的正常增生期宫内膜新鲜组织30例为对照组，提取基因组DNA,应用聚合酶链反应（Polymerase Chain Reaction; PCR）分别特异扩增酪氨酸激酶编码区的外显子19、21，纯化后双向测序，所得结果与正常基因序列进行比对分析。结果：1.从正常增生期子宫内膜、非典型增生子宫内膜到子宫内膜癌组织EGFR的表达逐渐增强，阳性表达率分别为30.0%、44.4%、73.2%，差异显著（p＜0.05）.其中EGFR在FIGO分期各组中阳性表达率为I期63.0%、 II期79.0%、III期90.0%，三者之间的差异无统计学意义（p=0.141）;在不同组织学分级各组中阳性表达率为G166.7%、G274.1%、G381.8%,差异明显有统计学意义（p＜0.05）；在肌层浸润≤1/2组及肌层浸润＞1/2两组中阳性表达率为44.4%、86.8%，差异有统计学意义（p＜0.05）；在有无淋巴结转移的两组中阳性表达率为69.6%、90.0%，差异无统计学意义（p=0.055）。2.从正常增生期子宫内膜、非典型增生子宫内膜到子宫内膜癌组织NF-kB的表达逐渐增强，阳性表达率分别为13.3%、38.9%、64.2%，差异显著（p＜0.05）.其中NF-kB在FIGO分期各组中阳性表达率为I期66.7.0%、II期63.2%、III期60.0%，三者之间的差异无统计学意义（p=0.962）;在不同组织学分级各组中阳性表达率为G155.6%、G263.0%、G381.8%,差异明显有统计学意义（p＜0.05）；在肌层浸润≤1/2组及肌层浸润＞1/2两组中阳性表达率为44.4%、73.7%，差异有统计学意义（p＜0.05）；在有无淋巴结转移的两组中阳性表达率为60.9%、80.0%，差异无统计学意义（p=0.073）。3.经对本实验的子宫内膜组织提取的DNA扩增纯化后双向测序得出，一例子宫内膜癌组织提取的DNA中，其编码EGFR酪氨酸激酶区的第19外显子有突变（G2281A），21外显子无突变；其余样本中未见突变。结论：1.子宫内膜癌组织分化越差，肌层浸润越深，EGFR及NF-kB蛋白的阳性表达率及表达强度越高，二者的阳性表达与肿瘤的组织学分级及肌层浸润深度有关，与临床分期及淋巴转移无关；2.子宫内膜癌组织中EGFR与NF-kB两蛋白的表达呈正相关；3.在子宫内膜癌组中发现一例EGFR基因第19外显子点突变（G2281A）。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 中英文缩写词表
• 第1章 引言
• 第2章 实验
• 第一部分 子宫内膜癌中 EGFR、NF-kB 蛋白的表达
• 1.1 材料
• 1.1.1 实验标本及临床病理资料
• 1.1.2 主要实验试剂
• 1.1.3 主要实验设备
• 1.2 实验方法
• 1.2.1 H-E 染色
• 1.2.2 免疫组化
• 1.2.3 结果判定
• 1.3 统计学方法
• 1.4 结果
• 1.4.1 EGFR 蛋白的表达
• 1.4.2 NF-kB 蛋白的表达
• 1.4.3 EGFR 蛋白的表达强度与子宫内膜癌临床及病理的关系
• 1.4.4 NF-kB 蛋白的表达强度与子宫内膜癌临床及病理的关系
• 1.4.5 子宫内膜癌中 EGFR 、NF-kB 二者表达的相关性
• 第二部分 子宫内膜癌中 EGFR 基因第 19、21 外显子序列检测
• 2.1 材料
• 2.1.1 实验标本
• 2.1.2 主要实验试剂
• 2.1.3 主要实验设备
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 DNA 提取、纯化及检测
• 2.2.2 引物设计及合成
• 2.2.3 聚合酶链式反应（PCR）
• 2.2.4 PCR 产物检测
• 2.2.5 PCR 产物纯化
• 2.3 测序
• 2.4 测序结果分析
• 2.5 统计学分析
• 2.6 结果
• 第3章 讨论
• 3.1 EGFR 与子宫内膜癌
• 3.1.1 EGFR 的生物学特性
• 3.1.2 EGFR 蛋白表达与子宫内膜癌临床病理特征的关系
• 3.1.3 EGFR 基因突变与子宫内膜癌
• 3.2 NF-kB 与子宫内膜癌
• 3.2.1 NF-kB 的生物学特性
• 3.2.2 NF-kB 蛋白表达与子宫内膜癌
• 3.3 子宫内膜癌中 EGFR 和 NF-kB 蛋白表达相关性
• 第4章 结论
• 致谢
• 参考文献
• 附图
• 攻读学位期间的研究成果
• 综述
• 参考文献