hSulf-1基因抑制肝癌SMMC-7721细胞迁移和增殖的机制探讨

论文摘要

研究背景与目的：肝癌的发生发展和转移与多种基因的突变和表达改变密切相关，与多种信号通路的激活或抑制密切相关。硫酸乙酰肝素（heparin sulfate，HS），又名葡糖胺聚糖链，是具有电负性的大分子线性聚合物，通过共价键与核心蛋白的丝氨酸甘氨酸残基结合，构成硫酸乙酰蛋白聚糖（HSPG）。HSPG是胞外基质中调控肝素结合生长因子信号通路的重要组成成分。而hSulf-1是可降解乙酰肝素的内硫酸酯酶，是一个新的肿瘤抑制因子，可能参与肿瘤发生发展过程。PI3K/AKT与ERK信号通路对于维持和促进细胞生长、增殖、凋亡等是必不可少的。本研究用病毒感染方法使hSulf-1在肝癌细胞系SMMC-7721中重新表达，观察是否能够降低PI3K/AKT、ERK等信号通路蛋白的表达，抑制细胞的增殖、迁移，并研究hSulf-1在肝癌组织及其癌旁组织中的表达和临床意义，进一步探讨hSulf-1抗肝癌的作用及其可能的机制。方法：1.培养SMMC-7721细胞，并以不同的感染复数（MOI），即MOI=50和100感染hSulf-1腺病毒，以Ad-EGFP为对照病毒，MOI=50；空白组为空白对照；2.感染48h后收集细胞提取蛋白，Western blot分析PI3K/AKT及ERK通路等信号蛋白表达变化情况；3.利用划痕实验，将相关病毒以上述感染方式感染SMMC-7721细胞，划痕后48h检测hSulf-1对SMMC-7721细胞迁移能力的影响；4.MTT检测相关病毒感染48h后，hSulf-1对SMMC-7721细胞增殖情况影响；5.收集70例HCC组织样本经临床病理分期分级后，以免疫组织化学方法检测HCC组织和癌旁组织中hSulf-1的表达情况，分析hSulf-1表达与患者临床病理参数之间的相关性，统计各组病人的生存时间并绘制生存曲线。结果：1.WB结果表明Ad-hSulf-1感染组较空白组及对照空病毒组相比，hSulf-1蛋白表达增高，p-AKT、p-ERK等蛋白表达降低，PTEN蛋白表达增高，且MOI=100较MOI=50效果更明显。2.划痕试验结果表明空白对照细胞迁移距离为637±30.5um，Ad-EGFP感染48h后细胞迁移距离为470±60.8um，Ad-hSulf-1处理48h后，SMMC-7721细胞迁移距离为317±51.3um（MOI=50），233±32.1um（MOI=100），hSulf-1处理后的细胞迁移距离明显降低。3.MTT结果显示，Ad-EGFP（MOI=50）和Ad-hSulf-1（MOI=50和100）处理48h后SMMC-7721细胞的增殖抑制率分别为27.37%、33.84%、47.81%。4.免疫组化结果显示，hSulf-1表达于细胞浆，染色均匀。70例肝癌组织标本中，阳性率为100%，其中高表达为17例，高表达率为24.3%；相应癌旁组织中阳性率为100%，其中高表达31例，高表达率为44.3%。hSulf-1的表达与患者肝硬化及病理分级等临床病理参数之间具有相关性，生存分析显示hSulf-1高表达的患者中位生存期为38个月，低表达患者中位生存期为27个月。结论：1.hSulf-1能够降低肝癌细胞系中AKT及ERK磷酸化水平，下调PI3K/AKT、ERK等信号通路活化程度，抑制SMMC-7721细胞的迁移和增殖。hSulf-1可能通过抑制细胞的增殖和侵袭能力来抑制肿瘤的形成。2.hSulf-1在肝癌组织中表达较癌旁组织相比降低，且其高表达患者中位生存期较低表达患者延长。hSulf-1的表达水平与肝癌患者的生存预后密切相关。3.hSulf-1在肝癌的发生、发展过程中可能起重要作用。有望成为肝癌治疗的新靶点。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 缩略词表
• 前言
• 第一章 hSulf-1 对 SMMC-7721 细胞增殖及迁移的影响
• 一、实验材料与主要器材
• 二、实验结果与结论
• 三、讨论
• 第二章 hSulf-1 对 SMMC-7721 细胞内 AKT/ERK 信号通路的影响
• 一、实验材料与主要器材
• 二、实验结果与结论
• 三、讨论
• 第三章 临床肝癌标本 hSulf-1 表达与患者临床病理特征及预后关系
• 一、实验材料与主要器材
• 二、实验结果与结论
• 三、讨论
• 全文小结
• 基金资助
• 参考文献
• 综述 1
• 参考文献
• 综述 2
• 参考文献
• 在读期间发表论文情况
• 致谢