菜籽卵磷脂的分离纯化工艺研究

论文摘要

磷脂作为细胞膜的基本构成物质,是一切生命活动的物质基础。而卵磷脂（磷脂酰胆碱,PC）作为磷脂的主要活性成分,有着许多独特的生物学活性。但关于高纯度的卵磷脂产品,我国主要依赖于进口。因此,研究卵磷脂的分离纯化工艺很有必要。本文围绕了以下三个方面来展开研究工作:首先,通过大量的基础理论与实验数据,找到了适合菜籽卵磷脂的定性和定量方法,利用高效液相蒸发光检测（HPLC-ELSD）方法,确定PC峰的保留时间为8.5min,利用外标法对菜籽卵磷脂进行定量分析,其保留时间和峰面积的变异系数分别为0.13%和1.16%,故重复性符合标准。其次,探讨并优化了以菜籽浓缩磷脂为原料,通过柱层析法提纯菜籽磷脂酰胆碱的工艺过程。首先通过95%乙醇、乙醚、丙酮等浸取工艺,然后利用硅胶柱层析技术制备高纯度PC产品。通过单因素实验、帕兰克特贝克曼实验和曲面响应实验对柱层析工艺进行优化。结果表明,柱层析的最佳工艺条件为:固定相选用100-200目粗孔2号硅胶,流动相为异丙醇:水（1:1,v/v）,最适上样量为0.084 g原料·（g硅胶）-1,上样浓度0.11g/mL,流动相流速1.5mL/min,高径比6:1。经HPLC-ELSD定量分析,产品纯度和回收率分别为85.6%和83.8%。最后,对树脂纯化卵磷脂的工艺做了研究。通过对几种树脂静态的吸附与解吸实验,选择出D113作为纯化卵磷脂的固定相,而后对各种工艺条件考察,以回收率和产品中PC纯度为指标,得到最佳工艺条件为:上样量为0.08 g·（mL resin）-1;流速为:3.0mL/min;上样浓度:0.1 g/mL洗脱液;高径比为10:1;前300mL用95%乙醇洗脱,后150mL用含异丙醇40%的异丙醇/水溶液洗脱。得到产品纯度为72.3%,回收率达72.6%。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 文献综述
• 1.1 引言
• 1.2 磷脂
• 1.2.1 磷脂的分子结构
• 1.2.2 磷脂的性质
• 1.3 卵磷脂的来源及其生理功能
• 1.3.1 卵磷脂的来源
• 1.3.2 卵磷脂的生理功能
• 1.4 卵磷脂的分离纯化方法
• 1.4.1 溶剂提取法
• 2萃取'>1.4.2 超临界CO₂萃取
• 1.4.3 膜分离法
• 1.4.6 柱色谱法
• 1.4.7 生物酶法催化
• 1.5 卵磷脂的分析方法
• 1.5.1 薄层层析法（TLC）
• 1.5.2 高效夜相色谱（HPLC）
• 1.5.3 其他方法
• 1.6 卵磷脂国内外研究现状及发展趋势
• 1.6.1 国外卵磷脂研究开发现状
• 1.6.2 国内卵磷脂研究开发现状
• 1.7 课题研究内容和意义
• 第二章 磷脂酰胆碱定性、定量分析方法的研究
• 前言
• 2.1 实验材料与仪器
• 2.1.1 实验材料
• 2.1.2 实验仪器
• 2.1.3 薄层色谱（TLC）定性分析的操作方法
• 2.1.4 原料的制备
• 2.1.5 薄层色谱（TLC）分析用溶液的配制
• 2.2 TLC分析方法的确定
• 2.2.1 TLC操作
• 2.2.2 展开剂的确定
• 2.3 HPLC分析方法的确定
• 2.3.1 UV与ELSD检测器比较
• 2.3.2 流动相的选择
• 2.3.3 ELSD检测条件的选择
• 2.3.4 柱温与流速的选择
• 2.3.5 洗脱方式的选择
• 2.4 定量分析方法的选择
• 2.5 HPLC分析结果
• 2.5.1 PC的标准曲线和检测限
• 2.5.2 PC的标准品与上样原料的HPLC图谱
• 2.5.3 重复性
• 2.6 本章小结
• 第三章 硅胶柱层析条件的选择与优化
• 引言
• 3.1 实验材料与方法
• 3.1.1 实验试剂与材料
• 3.1.2 实验仪器
• 3.1.3 实验方法
• 3.2 实验结果与讨论
• 3.2.1 流动相与固定相的确定
• 3.2.2 单因素优化
• 3.2.3 Plackett-Burman实验筛选对收率影响较大的因素
• 3.2.4 曲面响应优化工艺条件
• 3.2.5 最优实验条件下工艺研究
• 3.3 产品的红外鉴定结果
• 3.3.1 红外分析条件
• 3.3.2 PC的标准红外图谱
• 3.3.3 PC产品的红外图谱
• 3.4 结论
• 第四章 离子交换树脂纯化PC的研究
• 概述
• 4.1 实验材料与方法
• 4.1.1 实验材料
• 4.1.2 实验仪器
• 4.1.3 实验方法
• 4.2 实验结果与讨论
• 4.2.1 25℃树脂吸附平衡后静态吸附结果
• 4.2.2 单因素优化结果
• 4.2.3 不同乙醇浓度对淋洗结果的影响
• 4.3 本章小结
• 结语
• 参考文献
• 致谢