葛根总黄酮诱导急性髓细胞白血病细胞株SHI-1细胞凋亡的实验研究

论文摘要

[背景与目的]葛根是南京中医药大学第一附属医院血液科于1989年根据解毒活血法独创复方中药制剂“血复康”的组要成分之一。临床上用于治疗急性髓系白血病（acute myeloid leukemia, AML）及慢性髓细胞白血病（chronic myeloid leukemia,CML）已愈十年,疗效确切。近年来课题组研究发现,葛根主要活性成分葛根总黄酮（Puerariae radix flavones, PRF）在50μg/ml-200μg/ml的浓度范围内对NB4、Kasumi-1、HL-60、U937四种急性髓系白血病细胞株有选择性增殖抑制作用。本实验以急性单核细胞白血病细胞株SHI-1细胞株为研究对象,进一步研究PRF体外对SHI-1细胞的效应,并初步探讨可能的作用机制。[方法]以SHI-1细胞（MLL-AF6融合基因阳性,伴有P53表达异常；AML-M5b细胞株）为研究对象1)0-200μg/ml PRF处理SHI-1细胞24.、48及72小时,MTT法检测SHI-1细胞增殖抑制率,筛选PRF最佳工作浓度。2)0、50、100、150μg/mlPRF处理SHI-1细胞48小时,瑞吉氏染色观察细胞形态学改变；流式细胞术FITC-Annexinv/PI双染法检测细胞早期凋亡率；流式细胞术检测细胞周期进程。3)0、50、100、150μg/ml PRF处理SHI-1细胞48小时,RT-PCR检测MLL-AF6融合基因的改变。[结果]MTT法检测显示PRF在0-200μg/ml浓度范围内对SHI-1细胞有增殖抑制作用,有明显的时效-量效关系,48h IC50值为136.87μg/ml。0、50、100、150μg/mlPRF处理SHI-1细胞48h,瑞吉氏染色光镜下观察到细胞形态出现典型的凋亡特征；FITC-Annexinv/PI检测细胞早期凋亡率发现随药物浓度的增加,细胞凋亡率也明显升高；流式细胞术检测细胞周期发现随着PRF浓度的增加,G1期细胞比例减少,S期细胞比例增加,阻止细胞周期进程于S期；RT-PCR显示：随着PRF浓度的增加,MLL-AF6融合基因无明显变化。[结论]200μg/ml以下浓度PRF体外能抑制SHI-1细胞增殖,具有时效-量效关系；150μg/ml以下浓度PRF能够诱导SHI-1细胞凋亡,阻滞细胞周期于S期;150μg/ml以下浓度PRF虽能有效诱导SHI-1细胞凋亡,但并不能在mRNA水平下调MLL-AF6致病融合基因的表达。

论文目录

• 目录
• 摘要
• Abstract
• 绪论
• 第一部分：理论研究
• 一.急性白血病的中医病因病机及辨证论治
• 1. 中医对急性白血病的认识
• 2. 中医对急性白血病病因病机的阐述
• 3. 急性白血病的中医辨证论治
• 二.急性白血病的西医诊断及治疗进展
• 1. 病因及发病机制
• 2. 急性髓系白血病的分型
• 3. 急性髓系白血病的危险分层和预后因素
• 4. 急性白血病的治疗进展
• 三.葛根古今临床应用研究
• 1. 葛根中医临证应用概述
• 2. 葛根的现代药理研究进展
• 第二部分：葛根总黄酮诱导SHI-1细胞凋亡及其机制的实验研究
• 一.材料与方法
• 1. 材料
• 2. 方法
• 二.实验结果
• 三.结论
• 讨论
• 参考文献
• 附录
• 综述
• 参考文献
• 缩略语表
• 攻读硕士学位期间取得的学术成果
• 致谢