论文摘要
第一部分鱼藤素对Jurkat白血病细胞核孔蛋白与核磷蛋白的调节作用目的:研究鱼藤素对白血病细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其可能的作用机理,为其临床应用提供理论基础。方法:以人类T淋巴细胞白血病细胞系Jurkat作为研究对象,采用MTT法检测细胞增殖活性;DNA ladder法、Hoechst33258染色法和Annexin V-FITC/PI双标法检测细胞凋亡;流式细胞术、Western Blot、RT-PCR检测鱼藤素作用前后,Jurkat细胞内核孔蛋白Nup88、Nup214与核磷蛋白（nucleophosmin, NPM）表达水平的变化;激光共聚焦显微技术观察上述核孔蛋白与核磷蛋白的亚细胞定位情况。结果:（1）鱼藤素以剂量、时间依赖性方式抑制Jurkat细胞的增殖,其24 h的IC50是46.03±0.13 nmol/L。（2）鱼藤素以剂量依赖性方式诱导Jurkat细胞凋亡,40 nmol/L的鱼藤素处理24 h后出现明显的DNA剪切现象,伴有典型的凋亡细胞形态学改变,其总凋亡率达（19.87±1.76）%。（3）鱼藤素能同时在蛋白和基因水平,以剂量依赖性方式抑制核孔蛋白Nup88、Nup214以及核磷蛋白NPM的表达。结论:鱼藤素能明显抑制Jurkat细胞增殖,并诱导其凋亡。其抗白血病效应可能与其下调核孔蛋白Nup88、Nup214以及核磷蛋白NPM的表达有关。第二部分藤黄酸对白血病细胞的增殖、凋亡和细胞周期的影响目的:研究藤黄酸对人类多种白血病细胞系的体外抗肿瘤作用。方法:以HL-60（人急性粒细胞白血病细胞株）;U937（人急性单核细胞白血病细胞株）;K562（人慢性髓系白血病急变细胞株）为研究对象,采用MTT法检测藤黄酸对三种白血病细胞系增殖活性的影响;Hoechst33258染色法和Annexin V-FITC/PI双标法检测细胞凋亡;PI单染色法测定藤黄酸对三种白血病细胞系增殖周期的影响。结果:（1）藤黄酸对HL-60、U937、K562三种白血病细胞系均具有明显的抑制增殖作用。其中,HL-60细胞最为敏感,而K562细胞对藤黄酸的敏感性相对较差。（2）藤黄酸均能诱导HL-60、U937、K562细胞发生不同程度的凋亡,呈明显的剂量依赖性。其中,HL-60对藤黄酸尤为敏感,经1.6μmol/L的藤黄酸干预12 h后,一半以上的HL-60细胞发生早期凋亡,其总凋亡率高达（77.84±2.38） %;而藤黄酸对U937和K562细胞的诱导凋亡作用相对较弱。（3）藤黄酸对三种白血病细胞系的周期调控作用并不完全一致,U937和K562细胞经藤黄酸诱导后被阻滞于G0/G1期,S期细胞相应减少;相对而言,HL-60细胞的增殖周期并不受藤黄酸干预的影响,即使在出现显著细胞凋亡峰的情况下,仍未见明显的细胞周期的改变。结论:藤黄酸对多种白血病细胞系均有抑制细胞增殖、诱导凋亡的作用。其中,HL-60细胞对藤黄酸的抗白血病效应最为敏感。此外,藤黄酸也不是对所有白血病细胞均有诱导周期阻滞作用,HL-60细胞可能在其发生周期阻滞前即已凋亡。推测藤黄酸的抗白血病效应在不同细胞系中存在较大差异。第三部分藤黄酸对Jurkat白血病细胞核孔蛋白与核磷蛋白的调节作用目的:研究藤黄酸对白血病细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其可能的作用机理,为其临床应用提供理论基础。方法:以人类T淋巴细胞白血病细胞系Jurkat作为研究对象,采用MTT法检测细胞增殖活性;Hoechst33258染色法和Annexin V-FITC/PI双标法检测细胞凋亡;流式细胞术、Western Blot、RT-PCR、检测藤黄酸作用前后,Jurkat细胞内凋亡调控蛋白Bcl-2、Bcl-xL、核孔蛋白Nup88、Nup214、Nup98与核磷蛋白NPM的表达水平;免疫细胞化学染色法和激光共聚焦显微技术观察核孔蛋白与核磷蛋白的亚细胞定位情况。结果:（1）藤黄酸以时间、剂量依赖性方式抑制Jurkat细胞增殖,其24 h的IC50为1.822±0.148μmol/L。（2）藤黄酸以剂量依赖性方式诱导Jurkat细胞凋亡,伴有典型的凋亡细胞形态学改变。此外,凋亡调控蛋白Bcl-2、Bcl-xL的表达也随之减少。（3）藤黄酸以剂量依赖性方式下调Jurkat细胞内核孔蛋白Nup88、Nup214、Nup98与核磷蛋白NPM的表达水平。核孔蛋白Nup88与Nup214的亚细胞定位经藤黄酸干预后也发生了细微的变化。结论:藤黄酸能够抑制Jurkat细胞增殖,并诱导其凋亡。其抗白血病效应可能与其调控NPM以及核孔蛋白Nup88、Nup214、Nup98的表达和亚细胞定位有关。
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