人卵巢癌细胞系A2780中肿瘤干细胞的分离培养与鉴定

论文摘要

目的肿瘤干细胞具有无限增殖和多向分化的能力,具有高致瘤性和抵抗放化疗的特点,是恶性肿瘤复发和转移的根源。卵巢癌的特点是易于产生耐药和复发,高度提示可能存在肿瘤干细胞。本研究采用无血清悬浮培养法,从人卵巢癌细胞系A2780中分离培养卵巢癌干细胞球体,并对其特性进行鉴定。方法将人卵巢癌细胞系A2780制成单细胞悬液,悬浮于特殊配制的无血清培养基（serum free medium, SFM）中获得肿瘤细胞微球体,流式细胞仪检测细胞表面标志物CD44和CD133的表达；Transwell小室侵袭实验检测肿瘤细胞微球体的体外侵袭能力；CCK-8检测微球体细胞的增殖能力,比较两种细胞的倍增时间；将肿瘤微球体置于含有血清的培养基中使其诱导分化,并观察其形态学的变化。结果人卵巢癌细胞系A2780可在SFM中存活、增殖,形成悬浮生长并稳定传代的肿瘤细胞微球体,与正常贴壁的肿瘤细胞相比,此微球体高表达干细胞标志CD44、CD133（P<0.05）,具有更强的体外侵袭力（t=9.354,P<0.05）,具有更强的增殖能力（t=13.682,P<0.05）和更短的倍增时间（t=3.773,P<0.05）,此微球体还可以在血清环境下诱导分化为普通的卵巢癌细胞。结论用含有生长因子的SFM悬浮培养人卵巢癌细胞系A2780可获得卵巢癌细胞微球体,实验证实,此细胞球体中富集有肿瘤干细胞。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 引言
• 第1章 材料和方法
• 1.1 细胞系
• 1.2 主要实验试剂
• 1.3 主要实验仪器
• 1.4 主要试剂配制
• 1.5 主要实验方法
• 1.5.1 卵巢癌细胞系A2780细胞的培养与传代
• 1.5.2 卵巢癌微球体的培养与传代
• 1.5.3 流式细胞仪检测CD44和CD133的表达
• 1.5.4 Transwell小室侵袭实验
• 1.5.5 CCK-8测细胞增殖能力
• 1.5.6 细胞倍增时间比较
• 1.5.7 诱导分化实验
• 1.6 统计学方法
• 第2章 结果
• 2.1 显微镜下观察卵巢癌微球体的形成
• 2.2 流式细胞仪检测两种细胞CD44及CD133的表达
• 2.3 Transwell小室侵袭实验结果
• 2.4 细胞增殖实验
• 2.5 细胞倍增时间结果
• 2.6 诱导分化实验结果
• 第3章 讨论
• 结论
• 参考文献
• 综述
• 综述的参考文献
• 攻读学位期间的研究成果
• 致谢