银屑病皮损与正常皮肤组织miRNA表达差异分析

论文摘要

目的:利用miRNA芯片技术分析银屑病皮损与正常皮肤组织之间miRNA表达差异,同时对差异表达的miRNA所调控的靶基因进行预测和分子功能分析,以及如何参与银屑病发生等方面进行探讨,旨在进一步阐述本病发病机制的基础上为临床的靶向治疗提供依据。方法:本研究选择寻常型银屑病进行期3例,正常对照组3例,分别取皮损组织和正常皮肤组织进行总RNA提取,质量、纯度鉴定,符合Affymetrix miRNA芯片技术要求后按照miRNA芯片标准试实验流程进行荧光标记,杂交,然后利用Affymetrix GeneChip Scanner 3000激光共聚焦扫描仪对杂交结果进行图像扫描,配合 Affymetrix GeneChip Operating Software Version1.4 数据处理软件读取、处理数据;按照q-value（%）≤5,同时差异倍数（Fold Change）控制在2倍以上的标准筛选差异表达的miRNA作为分析数据的来源。对差异表达的miRNA进行靶基因预测和功能分析分别利用Human Target scan 5.1数据库和MAS系统Pathway和GO分类数据库。结果:①3例寻常型银屑病患者皮损组织与3例正常人皮肤组织相比较,差异表达的miRNA有5条,其中Hsa-miR-1308,表达上调;Hsa-miR-27a,Hsa-miR-199a-3p,Hsa-miR-199b-3p,Hsa-miR-181a,表达均下调,5 条差异表达的miRNA序列长度均集中在18～23个核苷酸之间。②Human Target scan5.1数据库对5条差异表达的miRNA所负调控的靶基因进行预测,数目达到2168条;利用MAS系统Pathway和GO分类数据库分析2168条靶基因,结果显示,这些靶基因主要涉及多种信号通路的传导,角质形成细胞的增殖与分化,免疫细胞增殖与调控等生物学过程。结论:银屑病是一种遗传基因异常性疾病,转录水平上的miRNA可靶向负调控大量mRNA,而这些被调控的mRNA之间又存在错综复杂的相互影响和作用,共同形成网络式的调节结构通过多种途径来参与银屑病的发生。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 缩略语
• 前言
• 研究现状、成果
• 研究目的、方法
• 1 对象和方法
• 1.1 研究对象
• 1.2 主要试剂及仪器
• 1.3 实验方法
• 2 结果
• 2.1 银屑病患者与正常对照组相比较差异表达的miRNA
• 2.2 差异表达的miRNA靶基因预测及其分子功能分析
• 3 讨论
• 3.1 差异表达的miRNA在肿瘤性疾病中的表达分析
• 3.2 差异表达的miRNA及预测的靶基因与银屑病病理基础的关系
• 结论
• 参考文献
• 发表论文和参加科研情况说明
• 附录
• 综述 miRNA芯片和基因表达谱芯片在皮肤学领域的研究概况
• 综述参考文献
• 致谢