神经调节素对脑缺血的保护作用机制研究

论文摘要

目的首先探讨神经调节素-1β（Neuregulin-1β,NRG-1β）对大鼠大脑中动脉缺血/再灌注（MCAO/R）损伤的保护作用,寻找其防治脑缺血损伤的最佳时机。然后进一步研究NRG-1β对猕猴脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法（1）成年健康Wistar大鼠200只,应用线栓法建立MCAO/R模型,经颈内动脉注射NRG-1β干预治疗。Longa法进行神经功能学评分,干湿重法测量脑组织含水量,氯化三苯基四氮唑（TTC）染色法测定脑梗塞体积,TUNEL法检测细胞凋亡,免疫组化和免疫荧光法检测水通道蛋白（AQP-4）表达水平的变化。（2）成年健康猕猴12只,经股动脉介入手术,将微球囊导管插入大脑中动脉阻断其血流,建立大脑中动脉缺血再灌注（MCAO/R）模型。治疗组动物于缺血2h再灌注前经微球囊导管注射NRG-1β,对照组同步给予等量的生理盐水,然后退出微球囊导管实现再灌注22h。应用Task-oriented评分评价动物的神经行为功能、氯化三苯基四氮唑（TTC）染色和磁共振成像（MRI）检测脑梗死体积的变化。结果（1）模型建立后,对照组大鼠均出现神经功能缺失症状,脑组织含水量和脑梗塞体积增大;细胞凋亡数量增加,AQP-4表达增强。NRG-1β治疗组上述指标均显著改善,其中以缺血1h给药再灌注24h组效果最好。对照组动物脑缺血2h即出现神经功能缺损表现,再灌注22h未见显著性变化;（2）NFG-1β治疗后未能明显改善猕猴神经功能（P＞0.05）。对照组动物脑缺血2h在MRI弥散加权成像（DWI）即出现高信号区,但T1、T2相表现不明显;再灌注22h在相应部位出现典型的T1低信号、T2高信号区,DWI高信号区扩大,TTC染色显示明显的缺血病灶。NFG-1β组T1、T2和DWI的异常信号区和TTC脑梗死体积未见明显减小（P＞0.05）。结论（1）神经调节素-1β对大鼠脑缺血再灌注损伤有一定的保护作用,缺血1h可能是其最佳治疗时间窗。（2）NRG-1β对猕猴脑缺血再灌注损伤的保护作用有待于进一步研究。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 第一章 大鼠脑缺血再灌注损伤后神经调节素治疗时间窗的实验研究
• 引言
• 1.1 材料
• 1.1.1 动物
• 1.1.2 药品、试剂
• 1.1.3 主要溶液配制
• 1.1.4 仪器设备
• 1.2 方法
• 1.2.1 大鼠脑血管铸型的制作
• 1.2.2 大鼠大脑中动脉闭塞/再灌注模型（MCAO/R模型）的制备
• 1.2.3 大鼠大脑中动脉闭塞/再灌注模型（MCAO/R模型）的评价
• 1.2.4 统计学处理
• 1.3 结果
• 1.3.1 大鼠脑血管铸型
• 1.3.2 神经行为功能评分
• 1.3.3 脑组织含水量
• 1.3.4 TTC染色
• 1.3.5 细胞凋亡
• 1.3.6 AQP-4的表达
• 1.4 讨论
• 1.4.1 制作大鼠MCAO/R模型的注意事项及评价
• 1.4.2 大鼠脑缺血再灌注损伤后神经调节素治疗时间窗
• 参考文献
• 第二章 神经调节素对猕猴脑缺血再灌注损伤的干预作用
• 引言
• 2.1 材料
• 2.1.1 实验动物
• 2.1.2 药品、试剂
• 2.1.3 实验器材
• 2.2 方法
• 2.2.1 MCAO/R模型的建立
• 2.2.2 干预措施
• 2.2.3 检测评价指标
• 2.2.4 统计学处理
• 2.3 结果
• 2.3.1 生命体征
• 2.3.2 神经功能评分
• 2.3.3 影像学检查
• 2.3.4 脑梗死体积
• 2.4 讨论
• 2.4.1 建立模型方法的优缺点比较
• 2.4.2 手术及围手术期注意事项
• 2.4.3 神经调节素对猕猴MCAO/R模型的保护作用
• 参考文献
• 结论
• 文献综述
• 攻读学位期间的研究成果
• 致谢