论文摘要
第一部分:银屑病患者外周血调节性T细胞的表达目的:探讨不同方法标记的银屑病患者外周血中调节性T细胞（Treg）的表达及其在银屑病免疫学变化中的作用。方法:利用流式细胞仪检测45例银屑病患者外周血中CD4+CD25highFoxp3+调节性T细胞在CD4+T细胞中的比例;用流式细胞仪和单克隆荧光抗体检测45例银屑病患者外周血中CD4+CD25high调节性T细胞百分率,对10例银屑病患者进行了CD4+CD25hi-intCD127low/-调节性T细胞百分率的检测。结果:红皮病型银屑病患者外周血中CD4+CD25brightTreg、CD4+CD25hhighFoxp3+Treg细胞比例均较正常人对照组显著增高,分别为5.37±1.99vs1.77±1.20（P＜0.01）和12.56±2.68vs7.09±2.2（P＜0.05）。寻常型银屑病患者中点滴型组银屑病患者CD4+CD25highFoxp3+Treg细胞比例低于斑块型（6.31±1.28vs8.18±1.55,P＜0.05）;脓疱型银屑病患者中脓疱存在患者CD4+CD25highFoxp3+Treg细胞比例明显低于脓疱消退患者（4.75±2.06vs8.25±11.5,P＜0.05）。银屑病和正常对照组CD4+CD25hi-intCD127low/-调节性T细胞在CD4+T细胞中比例同CD4+CD25high调节性T细胞比例相比,差异均有统计学意义（P＜0.05）;但两组之间相比无差异（P＞0.05）。结论:红皮病型银屑病外周血CD4+CD25highTreg、CD4+CD25highFoxp3+Treg细胞比例均增高,可能与红皮病型银屑病特殊的发病机制有关;Treg细胞比例的改变,可能参与了不同类型银屑病不同阶段的发病;结合CD127可纯化调节性T细胞。第二部分:银屑病患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞的功能分析目的:探讨银屑病患者外周血中CD4+CD25+调节性T细胞的功能改变及其在银屑病发病中的作用。方法:磁珠分离8例寻常型银屑病患者、6例正常健康对照外周血CD4+CD25+Treg细胞、CD4+CD25-Tresp细胞,1:1混合培养72小时,3H-thymidine掺入法测定两组混合培养后Treg细胞对Tresp细胞增殖的抑制及Treg细胞、Tresp细胞分别培养后的增殖能力;收集培养的上清液,ELISA法检测两组CD4+CD25+Treg细胞对CD4+CD25-T细胞分泌功能的影响;ReaL-time PCR检测两组CD4+CD25+Treg细胞、CD4+CD25-T细胞（Tresp）Foxp3的表达。结果:Tresp细胞、Treg细胞的增殖能力,银屑病患者和健康对照组相比,无统计学意义;银屑病患者Treg细胞对Tresp细胞增殖的抑制明显下降（19.5%vs60%,P＜0.01）;两者共培养后,银屑病患者Tresp细胞分泌高水平的IFN-γ（179.66±48.97vs87.36±33.36,P＜0.05）;较正常对照组相比,银屑病组Treg细胞对Tresp细胞分泌IFN-γ的抑制减弱（40%vs63%,P＜0.05）;两组IL-10与TGF-β分泌改变均无统计学意义;Treg细胞较Tresp细胞相比,表达高水平的Foxp3,银屑病患者Treg细胞Foxp3mRNA的表达同健康对照组相比无统计学意义。结论:寻常型银屑病患者外周血中CD4+CD25+Treg细胞对CD4+CD25-T细胞（Trep）增殖的抑制功能的降低可能参与了该病的发病过程。第三部分:细胞外腺苷代谢途径在寻常型银屑病患者外周血调节性T细胞发挥功能中的作用目的:探讨细胞胞外腺苷代谢途径（CD39、CD73分子、A2A受体）在银屑病患者外周血CD4+CD25+Treg细胞抑制功能中的作用。方法:利用流式细胞仪、单克隆抗体检测寻常型银屑病患者、正常健康对照组外周血中CD39、CD73及A2A受体在Treg细胞、Teff细胞表面的表达。结果:寻常型银屑病患者外周血中CD4+CD25highTreg细胞中,CD39、CD73双染（2.41±0.42vs6.11±1.27）及CD73单染比例（6.48±1.53vs14.28±2.46）均低于正常对照组（P＜0.01）,CD4+CD25medT细胞、CD4+CD25-Teff细胞中,银屑病患者CD73单染比例亦降低（14.34±1.63vs23.34±3.85,15.42±4.46vs28.58±6.42,P＜0.05）;加入Foxp3染色后,CD4℃D25highFoxp3+Treg部分,CD39/CD73双染（2.89±0.55vs5.97±1.09）及CD73单染比例在银屑病患者外周血中亦明显减少(7.69±1.49vs12.65±1.98（P＜0.01）,而CD4+CD25med、CD4+CD25-部分,CD39和CD73的表达无异常;寻常型银屑病患者外周血CD4+CD25highFoxp3+Treg细胞表面A2AR表达增加（43.7±9.55 vs 70.4±7.86,P＜0.05）,而CD4+CD25 Teff细胞表面A2AR表达同正常对照相比无统计学意义。结论:寻常型银屑病患者外周血Treg细胞表面胞外酶CD73表达降低,A2AR表达增加,这可能是导致银屑病患者外周血Treg细胞抑制功能减弱的机制之,参与了银屑病的发病。