以蛋白质相互作用为靶点的小分子先导化合物筛选

论文摘要

蛋白质相互作用在细胞增殖、分化、凋亡等基本生命活动中起重要作用,并与多种疾病的发生、发展相关。因此,对蛋白质相互作用进行干扰已经成为一种新的疾病治疗策略。由于蛋白质分子“热点”的发现,使得小分子化合物作为蛋白质相互作用抑制剂的潜力大大增加,这些“热点”紧凑的集中在蛋白质–蛋白质相互作用区域,对于蛋白质相互作用的高亲和力起着关键性的作用。近年基于蛋白质相互作用的药物研究进展迅速。Nrf2是一种与氧化应激相关的转录因子,Keap1-Nrf2-ARE通路的诱导剂被认为是一种化学预防剂。这些诱导剂能够保护细胞和组织减轻内源和外源应激条件的损伤。利用ARE报告基因建立了此通路调节分子的高通量筛选模型,经筛选188种化合物,发现化合物c7能够激活ARE报告基因和下游靶基因HO-1、NQO1的表达,并减轻H2O2介导的细胞毒作用。其机制与c7在转录后水平上导致Nrf2蛋白质的积累有关。进一步研究发现p38 MAPK途径可能参与此过程调控。此外还利用哺乳动物双杂交技术建立了以p53-MDM2蛋白质相互作用为靶点的小分子化合物筛选模型。以此模型筛选了188种化合物,初步发现几种活性化合物。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 前言
• 第一章 文献综述
• 1.1 引言
• 1.2 蛋白质-蛋白质相互作用及其抑制剂
• 1.3 Keap1-Nrf2-ARE 信号通路
• 1.3.1 Keap1-Nrf2-ARE 信号通路的分子机制
• 1.3.2 Keap1-Nrf2-ARE 信号通路与疾病的关系
• 1.3.3 Keap1-Nrf2-ARE 信号通路诱导剂
• 1.4 p53-MDM2 蛋白质相互作用
• 1.4.1 p53 途径
• 1.4.2 激活p53 途径有望成为一种新的肿瘤治疗策略
• 第二章 以Nrf2/Keap1相互作用为靶点的活性化合物筛选及化合物c7的分子机制研究
• 2.1 材料与方法
• 2.1.1 主要仪器设备
• 2.1.2 常用溶液的配制
• 2.1.3 质粒
• 2.1.4 细胞
• 2.1.5 化合物
• 2.1.6 常用试剂及试剂盒
• 2.1.7 一般细胞培养条件
• 2.1.8 细胞总蛋白质的提取
• 2.1.9 质粒DNA 的小量提取
• 2.1.10 Western Blot
• 2.1.11 哺乳动物细胞转染
• 2.1.12 荧光素酶报告基因检测
• 2.1.13 细胞活力测定
• 2.1.14 细胞总RNA 的提取
• 2.1.15 反转录PCR
• 2.1.16 Real-Time PCR
• 2.2 结果
• 2.2.1 筛选模型的建立及化合物筛选
• 2.2.2 化合物c7 可以激活Keap1-Nrf2-ARE 通路
• 2.2.3 化合物c7 具有细胞保护作用
• 2.2.4 化合物c7 的分子作用机制
• 2.2.5 化合物c7 激活ARE 活性过程中的信号通路
• 2.3 讨论
• 第三章 以p53-MDM2为靶点的药物筛选模型的建立
• 3.1 材料与方法
• 3.1.1 主要仪器设备
• 3.1.2 常用溶液的配制
• 3.1.3 质粒
• 3.1.4 细胞
• 3.1.5 常用试剂及试剂盒
• 3.1.6 重组质粒载体的构建
• 3.1.7 哺乳动物双杂交技术
• 3.2 结果
• 3.2.1 重组质粒载体的构建
• 3.2.2 筛选模型的建立及化合物库的初步筛选
• 3.2.3 筛选结果的初步验证
• 3.3 讨论
• 第四章 总结与展望
• 4.1 总结
• 4.2 展望
• 参考文献
• 致谢