论文摘要
目的:肝外胆管癌是一种相对少见的疾病,预后很差,其病因和发病机制不清,但它的发生也经历了正常胆管上皮到异型增生上皮到癌变的病理过程。在这个病理过程中,凋亡相关基因蛋白Survivin、Smac和核增殖抗原Ki-67的作用还未完全明确。本研究通过检测Survivin、Smac和Ki-67在肝外胆管正常上皮组织、异型增生组织和癌组织中的表达,探讨Survivin、Smac和Ki-67在肝外胆管癌发生发展中的作用,分析在肝外胆管癌发生发展中Survivin、Smac和Ki-67的相互作用,了解Survivin、Smac和Ki-67与肝外胆管癌组织病理学特征、临床分期和预后的关系。方法:标本:27例肝外胆管癌手术切除标本,包括24例高、中分化腺癌,3例低分化、未分化腺癌;10例肝外胆管异型增生组织; 5例正常胆管上皮组织。所有标本经10%甲醛固定,石蜡包埋,进行4μm连续切片10张。HE染色后,至少两名病理医师进行组织学诊断。异型增生组织诊断标准如下:细胞排列紊乱,层次增多,极性消失,大小形态不等,有轻中度的核异型,偶有分裂相。所有标本采用免疫组化S-P法检测Survivin、Smac和Ki-67的表达。免疫组化阳性染色标准评定采用半定量法。每张切片从阳性染色最强的部位开始,400倍光镜下连续观察5个视野,根据Survivin、Smac和Ki-67阳性细胞所占的百分比分为4个等级:阳性细胞所占百分比小于5%为阴性（-）;在6%-25%之间为弱阳性（+）;在26%-50%之间为中等阳性（++）;大于50%为强阳性（+++）。统计方法:利用SPSS10.0统计软件进行统计。阳性率比较采用卡方检验和确切概率法。相关性检验采用Spearman等级相关分析。p<0.05被认为有统计学意义。结果: 1.Survivin、Smac和Ki-67表达特征:Survivin在肝外胆管异型增生组织和癌组织中表达,阳性表达主要表现为胞浆浅黄色或黄色片状或细颗粒状着色,另外有4例表现为棕黄色核着色。Survivin在异型增生组织中3例弱阳性表达,1例中等阳性表达,1例强阳性表达。在癌组织中,8例弱阳性表达,5例中等阳性表达,7例强阳性表达。Smac在正常胆管上皮组织、异型增生组织和癌组织中均有阳性表达,为胞浆黄色或棕黄色片状或颗粒状着色,核染色被认为是非特异性着色。Smac在正常上皮组织中1例中等阳性表达,1例强阳性表达。在异型增生组织中2例弱阳性表达,3例中等阳性表达。在癌组织中7例弱阳性表达,8例中等阳性表达,8例强阳性表达。Ki-67在异型增生组织和癌组织中表达,阳性表达表现为胞核棕黄色或棕褐色着色。Ki-67在异型增生组织中1例弱阳性表达,1例中等阳性表达,2例强阳性表达。在癌组织中7例弱阳性表达,10例中等阳性表达,5例强阳性表达。2. Survivin、Smac和Ki-67在肝外胆管正常上皮组织、异型增生组织和癌组织中表达的比较: Survivin正常上皮组织中阳性表达率为20%,异型增生组织中阳性表达率50%,癌组织中阳性表达率74.1%。正常上皮组织和癌组织中Survivin表达差异有统计学意义（p=0.037<0.05）。Smac在正常上皮组织中阳性表达率为40%,异型增生组织中阳性表达率为50%,癌组织中阳性表达率为85.2%。异型增生组织和癌组织中表达差异有统计学意义（p=0.041<0.05）。Ki-67在正常上皮组织中阴性表达,异型增生组织中阳性表达率40%,癌组织中阳性表达率81.5%。正常上皮组织和癌组织中Ki-67表达差异有统计学意义（p=0.001<0.05）,异型增生组织和癌组织中Ki-67表达差异有统计学意义（p=0.038<0.05）。3. Survivin、Smac和Ki-67在肝外胆管异型增生组织及癌组织中表达的相关性分析:在10例异型增生组织中,1例Survivin、Smac和Ki-67同时阳性表达,阳性表达在几乎相同的组织部位,1例同时阴性表达。在27例肝外胆管癌组织中15例Survivin、Smac和Ki-67同时阳性表达, 4例阳性表达在几乎相同的组织部位,2例同时阴性表达。Survivin与Smac,Survivin与Ki-67在肝外胆管异型增生组织中和癌组织中的表达无相关性。Smac与Ki-67在肝外胆管异型增生组织中的表达有明显的正相关（r=0.688,p=0.028﹤0.05）,Smac和Ki-67在癌组织中表达无相关性（r=0.371,p=0.057>0.05）。4.Survivin、Smac和Ki-67的表达与肝外胆管癌组织病理学特征和临床分期的比较: Survivin、Smac和Ki-67在肝外胆管高、中分化癌中的表达与低分化、未分化癌中的表达差异无统计学意义,在无血管神经浸润无淋巴结转移的肝外胆管癌组织中的表达与有血管神经浸润有淋巴结转移的癌组织的表达差异无统计学意义,在Ⅰ期+Ⅱ期癌组织中的表达与Ⅲ期+Ⅳ期癌组织的表达差异亦无统计学意义。结论: 1.凋亡相关基因蛋白Survivin、Smac和核增殖抗原Ki-67在肝外胆管正常上皮组织、异型增生组织和癌组织中的表达呈逐渐升高的趋势,说明Survivin、Smac和Ki-67参与了肝外胆管癌的形成过程,凋亡和增殖失衡可能在肝外胆管癌发生发展中起重要作用。2.在肝外胆管正常上皮组织到异型增生组织到癌的序列过程中Survivin、Smac和Ki-67表达的逐渐升高,代表着正常细胞经过异型增生向恶性转化的细胞生物学行为特征,提示组织学尚正常的组织存在着异型增生的可能,其过高表达代表细胞发生恶性转变的可能。3.在肝外胆管癌发生发展中存在多个基因的精密调控,单一的基因可能不能解释肿瘤的生物学行为。