Pomiferin对小鼠卵巢早衰的干预作用及机制研究

论文摘要

背景及目的卵巢早衰（premature ovarian failure, POF）已成为严重危害女性健康的疾病之一,而且发病年龄越来越呈现年轻化,发病率越来越高。虽然随着科学技术的快速发展,在对卵巢早衰的诊断和治疗等方面取得了一些的进展,但因其病因及发病机理较复杂,早期确诊艰难,并发症广泛,未找到理想的治疗方法。因此,深入揭示卵巢早衰的病因及发病机制,寻找行之有效的干预卵巢早衰发生、发展的线索和物质,具有重要的理论和实用意义。目前对于POF尚缺乏理想的干预防治手段。现在医学主要采用激素替代疗法（HRT）、诱发排卵、免疫抑制治疗、自身或异体卵巢移植技术、卵子赠送及移植等方法。近年来,异黄酮类化合物已被证实有较好的治疗卵巢早衰的效果。Pomiferin（橙基异黄酮）是从桑橙中提取出来的一种异黄酮类化合物,具有植物雌激素活性。它的分子式为C25H24O6,分子量为420。已有研究证实Pomiferin具有强抗氧化剂、弱雌激素、金属螯合剂、抗菌剂、调控细胞周期等作用。国内外研究表明：Pomiferin具有植物雌激素作用,与内源性雌激素作用相似,而.且Pomiferin能与雌激素受体ERβ结合。与一般的雌激素相比,能够减少乳腺增生,子宫肌瘤,血栓等不良反应。从目前资料看,Pomiferin对卵巢早衰的治疗作用研究还不明确,尤其是对干预卵巢早衰的机制研究尚比较缺乏。现代医学普遍认为POF病因复杂,确切病因尚不明确,可能由众多因素引起,如遗传学因素,免疫因素,放疗和病毒感染等。而原始卵泡储备减少,凋亡加速,卵泡闭锁、卵泡成熟过程存在障碍也是其中之一。近年来,关于POF发生的凋亡机制渐渐引起人广大学者的关注。细胞凋亡是细胞衰老、死亡的主动过程,此过程受基因调控并按一定的程序进行。细胞凋亡为POF病因学提供了新的依据。在卵巢组织中,细胞凋亡调控了卵泡的繁殖和分化,可以说直接加速了卵泡闭锁。Fas和Fas—L的的结合是成熟T细胞中活化、诱导凋亡的主要途径。BCL-2是与Fas作用相反的分子,其能抑制Fas介导的细胞凋亡因此,基于以上分析推理,本实验拟探讨Pomiferin对小鼠卵巢早衰的干预作用,并从细胞凋亡的角度深入探讨Pomiferin对卵巢早衰的作用机理。方法1.免疫性POF动物模型,分组与给药。小鼠SPF级BABL/C雌性小鼠作为实验动物。用小鼠透明带ZP3第330—342个氨基酸序列作为免疫原建立POF小鼠模型。将小鼠随机分为空白组,佐剂组,模型组,Pomiferin（?）氐剂量组（0.25g/Kg体重）,Pomiferin中剂量组（0.5g/Kg体重）,Pomiferin高剂量组（0.75g/Kg体重）2.观察每组小鼠的卵巢形态学和动情周期的变化,用电子天平称量每组小鼠用药后的体重、卵巢重量、胸腺重量,比较重量指数。3.酶联免疫法检测小鼠外周血中FSH、E：水平。4. RT-PCR法测定卵巢组织Fas—L和Bc1-2 mRNA表达。5.免疫组化检测卵巢组织Fas—L和Bcl2蛋白表达。6. Western-blot检测卵巢组织Fas—L和Bcl2蛋白表达。结果模型组：1.动情周期：表现为动情周期紊乱,动情间期延长,阴道细胞涂片主要表现为大量白细胞及少量上皮细胞；2.卵巢形态：在卵巢间质,见到成熟卵泡少,而淋巴细胞和浆细胞浸润浸较多；3.体重、卵巢重量、胸腺重量指数均下降；4.E2明显降低,FSH明显升高；5.Fas—L明显升高,Bcl2明显降低。Pomiferin干预组：1.动情周期：动情周期轻度紊乱,动情间期稍长,主要为动情前期,阴道细胞涂片主要表现为有核上皮细胞,也有少部分角化细胞；2.卵巢形态：卵巢中的发育及成熟卵泡较多,而淋巴细胞和浆细胞浸润浸较少；3.卵巢重量、胸腺重量指数明显升高,体重指数稍微增加。4.E2显著升高,FSH显著降低。5.Fas-L明显减低,Bcl-2明显升高。结论1.通过以上对模型组小鼠动情周期、卵巢形态、卵巢重量指数、胸腺重量指数、E2、FSH等指标的检测,证实模型构建成功。2.Pomiferin对自身免疫性POF小鼠的免疫功能具有调节作用,能够使胸腺重量指数上升；3.Pomiferin对自身免疫反应所引起的卵巢早衰有改善作用,使卵巢重量指数明显上升,卵巢成熟卵泡增加,而且升高E2水平,降低FSH水平。4.Pomiferin能够抑制Fas介导的卵泡细胞凋亡,使Fas-L表达明显降低,Bcl2表达明显增加。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 1 前言
• 2 材料和方法
• 2.1 实验材料
• 2.2 主要试剂配制
• 2.3 实验方法
• 2.4 统计学方法
• 3 实验结果
• 3.1 动情周期
• 2和FSH的影响'>3.2 Pomiferin对免疫性POF小鼠E₂和FSH的影响
• 3.3 Pomiferin对免疫性POF小鼠胸腺、脾脏重量指数的影响
• 3.4 Pomiferin对POF小鼠卵巢形态学和卵巢重量指数的影响
• 3.5 RT-PCR检测fas-L、Bcl-2的mRNA水平
• 3.6 免疫组化检测Fas-L、Bcl-2的蛋白表达
• 3.7 Western blot检测fas-L、Bcl-2的蛋白表达
• 4 讨论
• 4.1 POF模型的建立
• 4.2 POF模型的验证
• 4.3 Pomiferin对卵巢组织Fas-L和Bcl-2的影响
• 5 小结
• 6 参考文献
• 综述
• 卵巢早衰的研究现状
• 参考文献
• 英文缩写词
• 个人简历
• 致谢