DNA杂交及免疫分析中纳米粒子化学发光探针研究

论文摘要

DNA杂交检测及免疫分析在生命科学研究中具有重要的意义，广泛应用于生物学、医学诊断等方面。随着生命科学的迅速发展，已有方法如放射性标记、酶标法等的局限性已日益显露出来，所以研究普遍适用性好、操作简便、灵敏度高的DNA杂交检测及免疫检测新方法显得越来越迫切。 本文用高灵敏度的化学发光技术研究了金属纳米粒子在DNA杂交检测及免疫检测中的应用，对特定序列的寡聚核苷酸及人IgG进行了超微量检测，取得了令人满意的结果。 以标记特定序列寡聚核苷酸的银纳米粒子为探针，通过杂交反应生成三明治复合体，其中银纳米粒子的量与待测靶序列的寡聚核苷酸浓度成正比。然后用化学发光分析法测定复合体上银的含量，以确定待测靶序列的含量。该法得出化学发光强度与靶序列浓度在14fmol L-1-1.4pmol L-1范围内呈良好的线性关系，检出限为5fmol L-1。并且通过控制杂交温度，可以通过发光信号区分单碱基错配靶序列与完全匹配靶序列，有可能为单核苷酸多态性分析（SNP）开辟一条新的途径。 同时用化学发光方法研究了金纳米粒子在DNA杂交分析中的应用。化学发光强度与靶序列浓度的动态响应范围为0.28pmol L-1-14pmol L-1，检出限约为0.1pmol L-1。通过进一步的金-银放大步骤，灵敏度提高了约两个数量级。 本论文还建立了一种高灵敏度的基于银增强胶体金标记探针的化学发光免疫分析方法。首先，通过羊抗人IgG、人IgG、和金标羊抗人IgG之间的免疫反应，形成一个三明治的复合体，然后加入银放大溶液，则银便会在金表面沉积，通过用化学发光法检测沉积的银的量来确定待测物人IgG的含量。该方法的检出限可达到0.005ng mL-1。该方法用于已成功用于人血清样品中IgG含量的测定，与酶联吸附免疫（ELISA）方法测定结果一致。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 引言
• 第一节 纳米粒子概述
• 第二节 纳米粒子在DNA杂交分析中的应用
• 第三节 纳米粒子在免疫分析中的应用
• 第四节 纳米粒子在生化分析中的其它应用概述
• 第二章 银纳米粒子化学发光探针在DNA杂交分析中的应用
• 2.1 前言
• 2.2 实验部分
• 2.3 结果与讨论
• 2.4 结论
• 第三章 化学发光技术研究金纳米粒子在DNA杂交分析中的应用
• 3.1 引言
• 3.2 实验部分
• 3.3 结果与讨论
• 3.4 结论
• 第四章 基于银增强胶体金标记探针的化学发光免疫分析研究
• 4.1 前言
• 4.2 实验部分
• 4.3 结果与讨论
• 4.4 结论
• 参考文献
• 硕士期间发表论文情况
• 致谢