论文摘要
本试验以常年性发情的绵羊品种（小尾寒羊和多浪羊）及典型季节性发情的绵羊品种（新疆细毛羊和阿勒泰羊）为研究对象,采用PCR-SSCP、PCR-RFLP及基因测序技术对影响MLT合成的两个关键调控酶N-乙酰转移酶（AA-NAT）和羟基吲哚-O-甲基转移酶（HIOMT）进行分析,旨在探索常年性发情绵羊品种与季节性发情绵羊品种AA-NAT和HIOMT基因序列的差异,为培育常年发情绵羊品种提供辅助选择标记（MAS）,实现绵羊的常年均衡繁殖提供理论依据。本试验获得如下研究结果:1.获得了绵羊AA-NAT基因的部分序列,大小为1142bp,包括AA-NAT基因的第1外显子（152bp）、第1内含子（290bp）、第2外显子（155bp）、第2内含子（338bp）和第3外显子（207 bp）,其中第1、2内含子为首次获得的序列。同时,首次获得绵羊HIOMT基因部分外显子（35bp）和部分3′非编码区序列（607bp）。2.对绵羊AA-NAT基因进行了多态性分析,发现AA-NAT第3外显子发生了一个A→G（第960bp处）的碱基突变,该位点的碱基突变致使本试验目标DNA片段中增加了一个SmaⅠ酶切位点（CCC/GGG）,并导致第115号氨基酸由精氨酸（Arg）变为甘氨酸（Gly）。在AA-NAT基因的3′非翻译区发现了3个突变,分别为C→G（第120bp处）、C→G（第131bp处）和A→G（第151bp处）。在HIOMT基因3′非翻译区检测到了丰富的多态性（9种基因型,6处突变）,其中在引物HIOMT2扩增片段的第94bp处有一个T→C的突变,第95bp处有一个G→C的突变,第96 bp处有一个G→A的突变,第201bp处有一个T→C的突变,第217bp处有一个G→A的突变;在引物HIOMT3扩增片段的第107bp处有一个A→G的突变。3.群体遗传学分析表明,在引物NAT1扩增产物的SmaⅠ酶切位点上,常年性发情与季节性发情绵羊品种群体内的基因型一致性很强,而两类群体间却明显不同。对HIOMT基因的3′非翻译区两对引物扩增位点进行了群体间基因频率卡方检验,发现季节性和常年性发情绵羊之间差异均极显著（ P<0.01）。4.在引物NAT1扩增产物的SmaⅠ酶切位点上,常年性发情的小尾寒羊和多浪羊群体A等位基因频率明显高于B等位基因频率,分别达0.9083、0.8710,均未发现BB型个体,提示A等位基因可能与绵羊的常年性发情呈正相关关系;对于引物NAT4扩增位点而言,在季节性发情的新疆细毛羊和阿勒泰羊群体中未发现A等位基因,且在这两个群体中均以B等位基因为优势基因,其频率分别达0.8276、0.7333,提示B等位基因可能与常年性发情有关。对于引物HIOMT2扩增片段而言,在常年性发情的小尾寒羊和多浪羊群体中均检测到CC基因型,而在季节性发情的新疆细毛羊和阿勒泰羊群体中均未检测到CC基因型,且C等位基因的基因频率在这两个羊品种中也较低,分别为0.1034、0.0667,提示C等位基因可能与季节性发情有关;对于引物HIOMT3扩增片段而言,在常年性发情的小尾寒羊和多浪羊群体中均以E等位基因为优势基因,其频率分别达0.7000、0.7581,在季节性发情的新疆细毛羊和阿勒泰羊群体中均以D等位基因为优势基因,其频率分别达0.5690、0.6500,这提示E等位基因可能与绵羊的常年性发情存在正相关关系,而D等位基因可能与绵羊的季节性发情存在正相关关系。