论文摘要
脑病发生机制是现代医学研究的热点之一,其中,脑缺血后的炎症过程已经成为目前研究的重要领域。中医药治疗多种脑源性疾病具有较好的疗效,特别是对于脑缺血损伤具有显著的临床优势。本研究以脑缺血-再灌注损伤炎症反应过程中产生的转移生长因子-β1（TGF-β1）作为切入点,应用TGF-β1单克隆抗体（TGF-β1mAb）阻断大鼠脑组织中的TGF-β1,通过对比来分析脑缺血-再灌注损伤过程中以TGF-β1为中心的炎性机制。本论文由文献综述和实验研究两部分组成。文献综述主要分析了脑缺血-再灌注损伤过程的炎性机制及其细胞因子作用机制的研究状况,重点阐述了细胞因子TGF-β1在脑缺血-再灌注损伤过程中的作用及其在其他领域的研究进展,为本研究设计提供思路与方法。实验研究部分为脑缺血-再灌注损伤过程中的TGF-β1环节分析及清开灵注射液（QKL）的影响作用研究,包括两方面的内容:第一部分主要探讨脑缺血-再灌注损伤过程中TGF-β1环节的变化及QKL的影响作用。选用健康雄性Wistar大鼠,利用夹闭双侧颈总动脉的方法复制大鼠前脑不完全缺血-再灌注损伤模型,分别给予QKL、TGF-β1抗体及该抗体与QKL共用。选择再灌注12h、24h、48h和72h四个时间点,对缺血皮层中的TGF-β1进行定位和半定量的观察,并以胶质纤维酸性蛋白（GFAP）含量显示其发源——星形胶质细胞的数量及功能变化,以明确其变化特征。以血清NSE为脑损伤程度的标志性指标,结合进行HE染色观察其组织病理学变化,比较TGF-β1及QKL对脑缺血-再灌注损伤的影响特征,以及QKL在TGF-β1环节上的作用特征。分析QKL是否通过TGF-β1环节发挥作用。第二部分探讨了TGF-β1在脑缺血-再灌注损伤炎症级联反应过程中的作用机制及QKL的影响作用。造模方法和动物分组同第一部分。检测血清sICAM-1及脑组织TNF-α、IL-1β、VEGF的含量,探讨TGF-β1对缺血-再灌注损伤时相关细胞因子变化的调节机制,以及QKL的影响作用。实验研究结果:一、脑缺血-再灌注损伤过程中TGF-β1环节的变化及QKL的影响作用1、阻断TGF-β1及应用QKL对大鼠血清NSE的影响大鼠脑缺血-再灌注损伤后,血清NSE的含量在各时间点均高于正常对照组（N组）,单纯使用TGF-β1mAb组（MT组）和单纯使用QKL组（MQ组）,NSE分泌量与模型组（M组）相比均有显著性降低,联合使用TGF-β1mAb、QKL（MQT组）后,彼此作用削弱,但NSE分泌量与M组相比仍有显著性降低。2、阻断TGF-β1及应用QKL对大鼠脑组织TGF-β1的影响在大鼠大脑皮层的整个缺血区均有显著的TGF-β1的阳性表达,其中以肿胀的神经元、胶质细胞周围、组织间隙以及血管旁最为明显。与N组相比,M组TGF-β1的表达量升高,MT组、MQ组TGF-β1的表达量较M组相比都有所降低;MQT组TGF-β1的表达量高于N组,与M组相比有显著性降低,TGF-β1 mAb和QKL的作用彼此拮抗。3、阻断TGF-β1及应用QKL对大鼠脑组织星形胶质细胞活化的影响GFAP是星形胶质细胞活化的唯一标志物,GFAP阳性染色呈棕黄色,位于星形胶质细胞浆内,周围有放射状突起,突起或细或粗,或长或短,有或无分支,形态如蜘蛛样。与N组相比,脑缺血-再灌注24h后,M组GFAP的表达开始明显增强;与M组相比,MT组和MQ组GFAP的表达量都有所减少,减弱了星形胶质细胞的活化,但MT组72h后GFAP表达量较M组有显著性增强;而MQT组GFAP的表达量较M组有明显减少,介于MT组和MQ组之间。4、阻断TGF-β1及应用QKL对大鼠脑组织缺血-再灌注损伤的组织病理学观察脑缺血-再灌注后,可见皮层脑组织结构损害,间质疏松呈水肿样;皮层微血管管壁塌陷、变形,甚至管腔闭塞或管壁崩解,管周空隙加大,并可见炎细胞聚集于血管周围,脑组织内可见散在淋巴细胞浸润。这种病理改变在损伤48h有明显的加重倾向。与M组比较,MQ组和MT组脑组织损伤呈显著减轻,以再灌注损伤48h的差别最为显著。二、TGF-β1在脑缺血-再灌注损伤炎症级联反应过程中的作用机制及QKL的影响作用1、阻断TGF-β1及应用QKL对脑缺血-再灌注后血清TNF-α含量的影响脑缺血-再灌注后,可见M组各时间点上TNF-α的分泌量明显多于M组,且在48h达到分泌高峰;MT组和MQ组TNF-α的分泌量在再灌注12h后,较M组有明显的降低;MQT组中TNF-α的分泌量仍然低于M组,但并不是TGF-β1mAb和QKL作用的累加,表现在它的分泌量低于M组,高于MT组和MQ组。2、阻断TGF-β1及应用QKL对脑缺血-再灌注后脑组织IL-1β含量的影响脑缺血-再灌注后,大鼠脑组织IL-1β分泌量增多,但QKL对其影响不大,仅在48h表现出降低的趋势,MT组的分泌量则明显低于M组,MQT组分泌的IL-1β的总量低于M组和MQ组,与MT组相类似。3、阻断TGF-β1及应用QKL对脑缺血-再灌注后血清sICAM-1含量的影响脑缺血-再灌注后,大鼠血清sICAM-1含量明显升高,且在24h达到分泌高峰,MT组和MQ组中sICAM-1的分泌量均减少,而MQT组中sICAM-1分泌量低于M组,高于MT组和MQ组,QKL和TGF-β1mAb的作用发生了拮抗。4、阻断TGF-β1及应用QKL对脑缺血-再灌注后大鼠脑组织VEGF含量的影响脑缺血-再灌注之后,VEGF分泌量明显升高,在24h达到分泌高峰,MQ组,MT组的分泌量均小于M组,MQT组VEGF的分泌量也高于N组,在12h之后开始降低,低于M组,从分泌总量上看,低于MQ组。结论:1、脑缺血-再灌注损伤后会促进星形胶质细胞的活化,使TGF-β1的分泌增多,从而促进炎症级联反应中其他细胞因子的分泌,造成脑组织损伤。2、清开灵具有解毒通络的作用,此次研究表现在清开灵可以降低星形胶质细胞的活化,直接减少缺血再灌注早期TGF-β1的分泌和相关炎症因子的分泌,从而显著减轻脑组织损害。4、QKL可能对TGF-β1→TNF-α、sICAM-1、VEGF作用环节有影响,对TGF-β1→IL-1β这一环节的影响尚没有证据支持,但也不排除由于QKL对BBB早期的保护作用,从而对这些细胞因子也有一定的影响。5、QKL还可能同时作用于AST→TGF-β1环节。
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标签：脑缺血再灌注损伤论文; 清开灵论文; 细胞因子论文; 转移生长因子论文;