论文摘要
缺血后处理是新近提出的一种减轻器官缺血再灌注损伤的新方法,指在缺血器官全面恢复再灌注之前给予反复多次的短暂再灌注-缺血处理。目前的研究业已证实,缺血后处理对心脏、肝脏、脑等器官具有保护作用。我科研究生已经成功的建立了肾脏缺血后处理的大鼠模型,且证明缺血后处理对肾脏同样具有保护作用。我们对此模型又进行了改进,在此基础上探讨缺血后处理对大鼠肾脏功能以及p38MAPK和JNK蛋白的影响。目的探讨缺血后处理（ischemic postconditioning,IPO）对缺血再灌注大鼠肾功能、肾脏p38MAPK和JNK蛋白的影响。方法将72只SD大鼠随机分为假手术（S）组、缺血-再灌注（IR）组、缺血后处理（IPO）组,每组又分为8个时间段（0.5h、1h、3h、6h、12h、24h、48h和72h）。S组分离出左肾动脉,结扎右肾蒂,暴露45min后关腹;IR组结扎右肾蒂,用血管夹阻断左肾动脉45min后恢复血供;IPO组结扎右肾蒂,用血管夹阻断左肾动脉45min后给予反复10次的恢复血供20s-阻断血供20s处理,然后再恢复血供。肾脏完全恢复血供后不同时段（0.5h、1h、3h、6h、12h、24h、48h和72h）留取血和肾组织标本,应用生化分析仪检测肾功能和化学法检测尿NAG酶,采用免疫组织化学和Western印迹方法检测上述三组肾组织中的p38MAPK、JNK蛋白的表达。结果1.与S组相比,IR组的血BUN和Scr均显著增高（P <0.05）,从1h开始轻微升高, 24h达最高峰[BUN（30.97±9.96）mmol/L ,SCr （238.3±54.2）μmol/L （P <0.05）], 48h开始回落到基线水平,72h无明显变化;IPO组血BUN和Scr略有降低,但各时间段与S组相比均无统计学意义（P >0.05）。与IR组相比,IPO组的血BUN和Scr总体水平低于IR组（P <0.05）,其高峰出现在12h [BUN（15.8±0.9）mmol/L ,SCr （44.7±3.5）μmol/L （P <0.05）],但24h下降变化最明显[BUN（8.0±0.6）mmol/L ,SCr（44.0±4.6）μmol/L （P <0.05）]。2.与S组相比,IR组和IPO组尿NAG酶均高于S组（P<0.05）。IR组尿NAG酶在术后6h达高峰[（98.47±2.69）U/L（P<0.05）],此后逐渐下降,48h回到基线水平;IPO组尿NAG酶高峰出现于3h[ （99.78±7.91）U/L（P<0.05）]。与IR组无相,IPO组6h下降最显著[（40.51±1.44）U/L（P<0.05）],一直持续到12h,48h回到基线水平。3.光镜下观察, p38MAPK和JNK在近端和远端肾小管上皮细胞都有表达,以近端肾小管上皮细胞表达为主。以S组为对照,IR组p38MAPK和JNK都在术后0.5h开始升高,1h达高峰[p38MAPK（96.6±3.7）%,JNK（89.8±6.1）% （P<0.05） ],3h开始有所回落,6h基本回到基线。随着再灌注的时间延长,12h又开始大量表达,24h又达高峰[p38MAPK（93.2±4.1）%,JNK（95.6±4.4）% （P<0.05） ],此后开始回落,48h回到基线水平,72h后也无明显变化。IPO组的p38MAPK/JNK蛋白表达较IR组明显减弱,以1h和24h减弱最显著,分别为[p38MAPK（49.8±22.5）%,JNK（28.4±5.3）% （P<0.05） ]和[p38MAPK（44.4±19.5）%,JNK（50.4±10.2）% （P<0.05） ]。Western blot方法证实,与S组相比,IR组和IPO组的p38MAPK和JNK蛋白表达强度增高。IR组p38MAPK和JNK蛋白在0.5h就有表达,1h[p38MAPK（1.03±0.08）,JNK（0.68±0.03） （P<0.05） ]和24h[p38MAPK（0.68±0.06）,JNK（0.77±0.06） （P<0.05） ]表达强度最明显。IPO组p38MAPK和JNK蛋白表达强度明显较IR组降低,以1h和24h降低最显著,分别为[p38MAPK（0.78±0.07）,JNK（0.50±0.03） （P<0.05） ]和[p38MAPK（0.44±0.09）,JNK（0.52±0.06） （P<0.05） ]。结论缺血后处理对缺血再灌注大鼠肾脏具有保护作用,通过减弱p38MAPK和JNK蛋白表达可能是其发挥保护作用途径之一。
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