论文摘要
田基黄Hypericum japonicum Thunb.,系藤黄科（Guttiferae）金丝桃属（Hypericum L.）植物,为一年生小草本,广泛分布于我国长江流域及其以南各地。田基黄提取物被制成注射液和糖浆用于治疗肝炎、原发性肝癌等。有文献报道田基黄及其注射液对多种肿瘤细胞有抑制作用,而对正常细胞无毒副作用,然而什么是田基黄抗肿瘤作用的活性成分尚无报道。因此,本研究以MTT法为药理指标,采用体外抗肿瘤活性跟踪与化学分离相结合的方法,确定了田基黄的抗肿瘤活性成分,并以其为指标对田基黄药材进行质量控制。采用80%乙醇对田基黄药材进行提取,依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取,得到不同部位萃取物,抗肿瘤活性测定显示:氯仿萃取层对Bel-7402和Hela细胞株有一定的抑制作用,IC50值分别为151.4μg·mL-1和174.9μg·mL-1。因此确定田基黄乙醇提取物的氯仿萃取层为抗肿瘤活性部位。取田基黄干燥全草5kg粉碎,过20目筛,用80%乙醇回流提取,氯仿萃取得到活性部位后,进行反复硅胶柱层析、聚酰胺柱层析、Sephadex LH-20柱层析和制备液相等多种手段对其化学成分进行分离、纯化。从该活性部位中分离得到7个化合物,经理化性质和光谱分析分别鉴定为:槲皮素-7-O-α-L-鼠李糖苷、异槲皮苷、小麦黄素、异巴西红厚壳素、槲皮素、金丝桃苷和槲皮苷。其中小麦黄素为首次从田基黄中分离得到。采用MTT法对以上7个化合物进行抗肿瘤活性分析,结果表明:小麦黄素和异巴西红厚壳素对Bel-7402,Hela,Colo,A549,SGC-7901和Heps等6种体外培养的肿瘤细胞具有明显的抑制作用。小麦黄素对以上6种肿瘤细胞的IC50为7.61～20.4μg·mL-1。异巴西红厚壳素对以上6种肿瘤细胞的IC50为3.86～8.52μg·mL-1。由此可以推测小麦黄素和异巴西红厚壳素为田基黄抗肿瘤作用的重要活性成分。建立了测定田基黄中抗肿瘤活性物质异巴西红厚壳素含量的反相高效液相色谱法,采用Zorbax SB-C18（250 mm×4.6 mm,5μm）柱,流动相为乙腈-0.04%磷酸水（47∶53,v/v）,流速为1.0 mL·min-1,检测波长为254 nm,柱温为30℃。异巴西红厚壳素线性范围1.68～56 mg·L-1,r=0.9997（n=6）;平均回收率为101.5%（RSD=2.5%,n=9）。该方法简便、快速、精密度好,可为田基黄的质量控制提供指标。建立了田基黄中异槲皮苷、槲皮苷、槲皮素-7-O-α-L-鼠李糖苷和槲皮素等4种黄酮同时含量测定的反相高效液相色谱法,采用Zorbax SB-C18色谱柱（250 mm×4.6 mm,5μm）,以乙腈-0.5%（v/v）HAc水溶液为流动相进行梯度洗脱,流速为1.0 mL·min-1,检测波长为360 nm,柱温为35℃。异槲皮苷、槲皮苷、槲皮素-7-O-α-L-鼠李糖苷和槲皮素浓度分别在6.09～203 mg·L-1、18.93～631 mg·L-1、1.89～63.0 mg·L-1和4.11～137 mg·L-1范围内与峰面积积分值线性关系良好,相关系数均（r2＞0.999）符合要求,4种黄酮的回收率为97.5%～102.6%,相对标准偏差（RSD）均小于3%。该方法简便、快速、准确,可作为田基黄质量控制的一个有效方法。
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