本文主要研究内容
作者吴谨（2019）在《荧光假单胞菌中TetR家族转录因子PhIH的结构与功能研究》一文中研究指出：荧光假单胞菌(Pseudommonas fluorescens)是革兰氏阴性细菌,是典型的有益植物的共生细菌。它能够生产出许多次级代谢产物,如2,4-二乙酰基间苯三酚(2,4-diacetylphloroglucinol,2,4-DAPG),氰化氢和铁载体,增强了荧光假单胞菌与其他土壤微生物的竞争优势。其中,抗生素2,4-DAPG被证明是荧光假单胞菌抑制植物病害的关键性因素。2,4-DAPG是一种小分子化合物,是许多荧光假单胞菌的生物防治来源,其合成相关的基因簇phl包含八个基因,被命名为phlACBDEFGH,其中TetR家族转录调节因子(TetR family transcriptional regulator,TFR)PhlH最近己显示具有2,4-DAPG生物合成的负反馈调节作用。phlG基因编码C-C键水解酶,能特异性地将2,4-DAPG降解为低毒性的单乙酰基间苯三酚(monoacetylphloroglucinol,MAPG)。PhlH可以通过检测2,4-DAPG的浓度来调节phIG基因的表达,动态释放2,4-DAPG的潜在代谢负担,它为荧光假单胞菌提供了选择优势,在竞争激烈的根际中具有生物控制功能。通过序列比对我们发现PhlH较其他蛋白序列同源性很低,结构未知。本研究通过X射线衍射得到了分辨率为2.4A的apo-PhlH晶体结构。分析apo-PhlH结构,我们可以看出整个蛋白结构处于不稳定的状态,特别是负责变构的区域。其中两个loop中有部分氨基酸残基是缺失的,α6和α7之间的loop以及α8和α9之间的loop,推测缺失的原因由于该区域处于灵活的状态导致没有捕捉到电子密度,从而使部分氨基酸残基没有完全的搭建出来。除此之外还得到了分辨率为2.1A的PhlH-2,4-DAPG复合物的晶体结构,PhlH-2,4-DAPG结构处于一种低能量的稳定状态。通过对apo-PhlH和PhlH-2,4-DAPG结构的DNA结构域(DNA-binding domain,DBD)对比分析,我们发现PhlH-2,4-DAPG结构相比apo-PhlH结构整个DBD产生很大的位移,由原本apo-PhlH结构中两个α3之间34A的距离,增大了 12A变成了46A形成了不容易与DNA大沟结合的距离。EMSA和ITC实验揭示了特定氨基酸残基与配体或者DNA结合的能力变化,其中F173、L85、L186、V190、T123、L177和E132这7个氨基酸对2,4-DAPG的结合是关键的,而H76和K144形成氢键控制2,4-DAPG的进入,起到了门控的作用。这些结果都为TFRs可能的存在状态提供了证据,有助于理解由配体结合诱导的分子基础和构象改变的操纵子激活。
Abstract
ying guang jia chan bao jun (Pseudommonas fluorescens)shi ge lan shi yin xing xi jun ,shi dian xing de you yi zhi wu de gong sheng xi jun 。ta neng gou sheng chan chu hu duo ci ji dai xie chan wu ,ru 2,4-er yi xian ji jian ben san fen (2,4-diacetylphloroglucinol,2,4-DAPG),qing hua qing he tie zai ti ,zeng jiang le ying guang jia chan bao jun yu ji ta tu rang wei sheng wu de jing zheng you shi 。ji zhong ,kang sheng su 2,4-DAPGbei zheng ming shi ying guang jia chan bao jun yi zhi zhi wu bing hai de guan jian xing yin su 。2,4-DAPGshi yi chong xiao fen zi hua ge wu ,shi hu duo ying guang jia chan bao jun de sheng wu fang zhi lai yuan ,ji ge cheng xiang guan de ji yin cu phlbao han ba ge ji yin ,bei ming ming wei phlACBDEFGH,ji zhong TetRjia zu zhuai lu diao jie yin zi (TetR family transcriptional regulator,TFR)PhlHzui jin ji xian shi ju you 2,4-DAPGsheng wu ge cheng de fu fan kui diao jie zuo yong 。phlGji yin bian ma C-Cjian shui jie mei ,neng te yi xing de jiang 2,4-DAPGjiang jie wei di du xing de chan yi xian ji jian ben san fen (monoacetylphloroglucinol,MAPG)。PhlHke yi tong guo jian ce 2,4-DAPGde nong du lai diao jie phIGji yin de biao da ,dong tai shi fang 2,4-DAPGde qian zai dai xie fu dan ,ta wei ying guang jia chan bao jun di gong le shua ze you shi ,zai jing zheng ji lie de gen ji zhong ju you sheng wu kong zhi gong neng 。tong guo xu lie bi dui wo men fa xian PhlHjiao ji ta dan bai xu lie tong yuan xing hen di ,jie gou wei zhi 。ben yan jiu tong guo Xshe xian yan she de dao le fen bian lv wei 2.4Ade apo-PhlHjing ti jie gou 。fen xi apo-PhlHjie gou ,wo men ke yi kan chu zheng ge dan bai jie gou chu yu bu wen ding de zhuang tai ,te bie shi fu ze bian gou de ou yu 。ji zhong liang ge loopzhong you bu fen an ji suan can ji shi que shi de ,α6he α7zhi jian de loopyi ji α8he α9zhi jian de loop,tui ce que shi de yuan yin you yu gai ou yu chu yu ling huo de zhuang tai dao zhi mei you bu zhuo dao dian zi mi du ,cong er shi bu fen an ji suan can ji mei you wan quan de da jian chu lai 。chu ci zhi wai hai de dao le fen bian lv wei 2.1Ade PhlH-2,4-DAPGfu ge wu de jing ti jie gou ,PhlH-2,4-DAPGjie gou chu yu yi chong di neng liang de wen ding zhuang tai 。tong guo dui apo-PhlHhe PhlH-2,4-DAPGjie gou de DNAjie gou yu (DNA-binding domain,DBD)dui bi fen xi ,wo men fa xian PhlH-2,4-DAPGjie gou xiang bi apo-PhlHjie gou zheng ge DBDchan sheng hen da de wei yi ,you yuan ben apo-PhlHjie gou zhong liang ge α3zhi jian 34Ade ju li ,zeng da le 12Abian cheng le 46Axing cheng le bu rong yi yu DNAda gou jie ge de ju li 。EMSAhe ITCshi yan jie shi le te ding an ji suan can ji yu pei ti huo zhe DNAjie ge de neng li bian hua ,ji zhong F173、L85、L186、V190、T123、L177he E132zhe 7ge an ji suan dui 2,4-DAPGde jie ge shi guan jian de ,er H76he K144xing cheng qing jian kong zhi 2,4-DAPGde jin ru ,qi dao le men kong de zuo yong 。zhe xie jie guo dou wei TFRske neng de cun zai zhuang tai di gong le zheng ju ,you zhu yu li jie you pei ti jie ge you dao de fen zi ji chu he gou xiang gai bian de cao zong zi ji huo 。
论文参考文献
论文详细介绍
论文作者分别是来自安徽大学的吴谨，发表于刊物安徽大学2019-07-03论文，是一篇关于荧光假单胞菌论文,安徽大学2019-07-03论文的文章。本文可供学术参考使用，各位学者可以免费参考阅读下载，文章观点不代表本站观点，资料来自安徽大学2019-07-03论文网站，若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权，请联系我们删除。
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