视神经NgR mRNA的表达及其siRNA表达质粒载体的构建

视神经NgR mRNA的表达及其siRNA表达质粒载体的构建

论文摘要

视神经损伤是临床常见的眼外伤,迄今仍缺乏有效的治疗手段。目前的研究证实:视神经再生失败的原因除了与其自身再生潜力低下,损伤后营养因子的缺乏,胶质瘢痕的形成等有关外,其所处的微环境中存在着神经生长抑制因子也是一个重要因素。2002年研究发现:少突胶质细胞及其所形成的髓鞘中存在着的抑制蛋白——Nogo-66、MAG、OMgp,均通过NgR发挥作用,针对NgR的单克隆抗体可有效地促进中枢神经元轴突再生。NgR在中枢神经系统中分布广泛,灰质中含量较高,大脑皮层、海马、背侧丘脑、小脑颗粒细胞等都有分布,但是,视神经作为一种特殊的中枢神经,其中是否存在NgR的表达尚未见报道,同时,能否利用RNA干扰技术来抑制NgR基因表达,继而阻断几种抑制因子(Nogo-66、MAG、OMgp)的作用,进而促进视神经再生修复也未见报道。本实验的目的:检测NgR mRNA在视神经的表达情况,观察视神经损伤后NgR mRNA的表达变化,构建NgR mRNA特异的siRNA表达质粒,为进一步通过RNA干扰途径来抑制NgR基因表达,促进视神经再生研究奠定基础。方法:实验分为3个部分: (一).使用地高辛标记的寡核苷酸探针通过原位杂交方法检测视神经中NgR mRNA的表达情况; (二).采用荧光定量PCR方法检测视神经损伤后NgR mRNA的表达变化;(三).构建NgR mRNA的siRNA表达质粒。结果:1.原位杂交证实视神经NgR mRNA表达阳性,对照实验呈阴性反应;2.荧光定量PCR显示视神经损伤后NgR mRNA表达无显著性变化(P>0.05);3.成功的构建了两个NgR特异的RNA干扰表达质粒,为下一步实验奠定了基础。结论:视神经存在NgR mRNA表达,提示NgR介导的抑制途径可能是视神经损伤后难以再生的一个原因;视神经钳夹伤后NgR mRNA表达无显著性变化,而我们的前期实验显示视神经钳夹伤后Nogo-A mRNA的表达增高,配体和受体表达的不一致性,提示了Nogo-A除了抑制再生外,可能还有其它尚未阐明的功能,较之阻断

论文目录

  • 英文缩写一览表
  • 英文摘要
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  • 论文正文 视神经NgR mRNA 的表达及其siRNA 表达质粒载体的构建
  • 前言
  • 实验一 原位杂交检测成年大鼠视神经NgR mRNA 的表达
  • 材料与方法
  • 结果
  • 实验二 视神经钳夹伤后NgR mRNA 表达的变化
  • 材料和方法
  • 结果
  • 实验三 NgR 特异的siRNA 表达质粒载体构建
  • 材料与方法
  • 结果
  • 讨论
  • 结论
  • 致谢
  • 图片
  • 参考文献
  • 文献综述 髓磷脂相关性轴突生长抑制因子与中枢神经再生
  • 参考文献
  • 硕士期间撰写和发表的论文
  • 附录1 pSUPER-EGFP1 质粒载体结构示意图
  • 附录2 NgR siRNA 阳性序列1 设计报告图
  • 附录3 NgR siRNA 阳性序列2 设计报告图
  • 相关论文文献

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    • [2].血塞通注射液对局灶性脑梗死大鼠NgR mRNA及蛋白表达的影响[J]. 辽宁中医杂志 2013(08)
    • [3].电针对脊髓损伤大鼠Nogo-A、NgR mRNA及蛋白表达影响的实验研究[J]. 时珍国医国药 2017(04)
    • [4].运动训练对脊髓损伤大鼠Nogo-A、NgR mRNA表达的影响[J]. 中国康复医学杂志 2011(02)
    • [5].脊髓损伤大鼠NogoA、NgR mRNA和蛋白的时相表达及电针治疗时间窗[J]. 中国康复理论与实践 2018(06)

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    视神经NgR mRNA的表达及其siRNA表达质粒载体的构建
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