桂枝抗过敏活性成分的研究

论文摘要

本文以传统中药桂枝为研究对象,以透明质酸酶抑制率来评价其抗过敏作用,通过溶剂提取、萃取分离、柱分离纯化的方法获得透明质酸酶抑制率较高的样品,通过薄层鉴定、颜色反应、紫外、红外光谱及LC-MS联用技术对纯度较高的样品进行初步的结构鉴定。同时,跟踪桂枝提取物对羟基自由基、过氧化氢、超氧阴离子和DPPH·的清除率,通过与透明质酸酶抑制率的对比研究,初步预测了桂枝抗过敏作用的机制,并对抗过敏植物的筛选提供了一定的依据。实验结果如下:桂枝抗过敏成分的提取条件为桂枝粉碎过20目筛,70%乙醇溶液提取,提取温度为70℃,料液比为1:10,1.0h/次,重复提取3次;提取液依次通过氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取,获得抗过敏活性较强的组分,将此组分通过大孔树脂、聚酰胺和葡聚糖凝胶进行分离纯化,得到抗过敏活性最强的组分桂15,其酶抑制率高达93%（1.2mg/mL）,总酚含量为90%。桂15在薄层层析板上展开后喷上三氯化铁-铁氰化钾溶液显示为蓝色,颜色反应证明其为缩合单宁类物质,紫外、红外光谱也显示多酚特性,通过液质联用技术进一步确定桂15中含缩合单宁的代表酚儿茶素和表儿茶素。本实验同时跟踪了样品的抗氧化性,结论是抗过敏性强的样品具有较强的抗氧化性,这对抗过敏植物的筛选和抗过敏作用的机制的研究具有一定的启发作用。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一章 绪论
• 1.1 樟属植物桂枝概况
• 1.2 桂枝的国内外研究发展
• 1.2.1 桂枝的化学成分研究
• 1.2.2 桂枝的应运研究
• 1.3 过敏性疾病
• 1.3.1 过敏性疾病的现状
• 1.3.2 过敏性疾病的发病机理
• 1.3.3 过敏性疾病的治疗
• 1.3.4 抗过敏活性的评价体系
• 1.4 中草药活性成分的研究
• 1.4.1 天然药物活性成分的提取方法
• 1.4.2 天然药物活性成分的分离方法
• 1.4.3 天然药物活性成分的鉴定方法
• 1.5 研究方案
• 1.5.1 研究目的
• 1.5.2 研究内容
• 1.5.3 本课题的创新之处
• 第二章 桂枝抗过敏活性成分的提取与初纯化
• 2.1 材料、试剂与设备
• 2.1.1 实验材料
• 2.1.2 主要试剂
• 2.1.3 主要设备
• 2.2 样品抗过敏活性检测:Elson-Morgan改良法
• 2.2.1 实验原理
• 2.2.2 试剂配制
• 2.2.3 实验步骤
• 2.2.4 抗过敏活性的计算
• 2.3 桂枝抗过敏活性成分的提取
• 2.3.1 粗提方法的选择
• 2.3.2 粗提液的萃取流程
• 2.4 活性成分的初纯化
• 2.4.1 大孔树脂DiaionHP-20的预处理
• 2.4.2 大孔树脂DiaionHP-20的再生
• 2.4.3 大孔树脂Diaion HP-20静态吸附量的测定
• 2.4.4 大孔树脂的装柱
• 2.4.5 大孔树脂DiaionHP-20对活性成分的初步纯化
• 2.4.6 样品抗过敏活性成分的初步鉴定
• 2.4.7 样品的紫外可见光谱扫描
• 2.5 样品总酚含量的测定:Folin-Ciocalteau法
• 2.5.1 试剂的配制
• 2.5.2 总酚标准曲线的制作
• 2.6 抗氧化实验与透明质酸酶实验的相互佐证
• 2O₂）能力的测定'>2.6.1 活性成分清除过氧化氢（H₂O₂）能力的测定
• 2.6.2 清除羟自由基（OH·）的实验
• 2.6.3 超氧阴离子自由基清除实验
• 2.6.4 清除DPPH·的实验
• 2.7 结果和讨论
• 2.7.1 桂枝活性成分粗提取的最佳方法
• 2.7.2 抗过敏有效成分的萃取分离
• 2.7.3 大孔树脂的静态吸附量测定及其对样品的纯化效果
• 2.7.4 大孔树脂对抗过敏活性成分的纯化
• 2.7.5 大孔树脂纯化后桂枝抗过敏有效成分的显色反应
• 2.7.6 大孔树脂纯化后桂枝抗过敏有效成分的紫外扫描
• 2.7.7 大孔树脂纯化后桂枝抗过敏有效成分的总酚含量
• 2.8 小结与讨论
• 第三章 抗过敏活性成分的进一步纯化
• 3.1 材料、试剂与设备
• 3.1.1 实验材料
• 3.1.2 实验药品、试剂
• 3.1.3 设备
• 3.2 实验方法
• 3.2.1 聚酰胺分离抗过敏成分
• 3.2.2 葡聚糖凝胶Sephadex LH-20对桂枝抗过敏有效成分的分离
• 3.2.3 薄层层析实验
• 3.2.4 颜色反应定性实验
• 3.3 结果和讨论
• 3.3.1 聚酰胺对抗过敏有效成分的纯化
• 3.3.2 聚酰胺纯化后桂枝抗过敏有效成分的总酚含量测定
• 3.3.3 样品的紫外光谱扫描
• 3.3.4 葡聚糖凝胶SephadexLH-20对有效成分的进一步纯化
• 3.3.5 强抗过敏成分桂15的薄层层析鉴定
• 3.3.6 强抗过敏成分桂15的颜色反应结果
• 3.4 小结与讨论
• 第四章 桂枝抗过敏有效物质的鉴定和结构分析
• 4.1 材料、试剂与设备
• 4.1.1 实验材料
• 4.1.2 主要试剂
• 4.1.3 主要设备
• 4.1.4 实验方法
• 4.2 结果和讨论
• 4.2.1 标准样品的HPLC色谱图
• 4.2.2 桂15的HPLC分析
• 4.2.3 桂15的紫外光谱分析
• 4.2.4 桂15的宏外光谱分析
• 4.2.5 桂15的LC-MS分析
• 4.2.6 验证实验:标准品透明质酸酶抑制率的测定结果
• 4.3 小结与讨论
• 第五章 总结与展望
• 5.1 课题总结
• 5.2 课题研究与展望
• 参考文献
• 致谢
• 攻读硕士期间参与的科研项目与学术论文发表情况