论文摘要
[目的]：探讨不同疾病状态浆细胞肿瘤1p12、1p13.3、1p21.2和1p32.3位点的遗传学异常特点以及各位点异常在MM患者中的预后意义；寻求适合1p临床FISH检测指标,更好地指导临床诊治；补充和完善MM患者分子遗传学预后指标,为建立适合我国MM患者的预后分层标准和个体化治疗体系提供依据。[方法]：应用定位于1p12、lp13.3、1p21.2和1p32.3位点的FAM46C、AHCYL1、 CDC14A和CDKN2C基因的BAC克隆制作位点特异性FISH探针对我院1999.8-2012.11确诊的265例初诊、90例复发／难治、56例缓解（≥PR）MM患者,5例原发性浆细胞白血病（pPCL）,7例继发性浆细胞白血病（sPCL）,2例意义未明单克隆免疫球蛋白血症（MGUS）患者纯化的CD138+细胞行FISH检测,分析各种疾病状态患者1p各位点遗传学异常的特点,并结合临床和生存资料,分析1p各位点异常和临床指标的相关性及其对患者预后的影响。[结果]：（1）1p12、1p13.3、1p21.2和1p32.3位点在初治患者中的缺失率分别为13.0%、18.7%、20.8%和9.06%,复发/难治患者缺失率分别为16.7%、15.2%、23.3%和10.0%,两组缺失率无明显差异。5例pPCL和2例MGUS患者未检测到上述位点缺失。sPCL患者上述位点缺失率分别为28.6%、42.9%、57.1%和57.1%,高于初治患者（P=0.239,0.019,0.022,0.000）。部分MM患者存在上述位点扩增,1p各位点的扩增率分别为1p12：3.04%、1p13.3：2.60%、lp21.2：3.77%和1p32.3：4.15%,各位点的扩增率均明显低于缺失率（P=0.000,0.000,0.000,0.021）。（2）230例初治患者同时检测了1p四个位点,57例至少存在1个或1个以上位点的缺失,总1p缺失率为24.8%,缺失一个、两个、三个和四个位点的患者分别占26.3%、22.8%、35.1%和15.8%,其中大片段缺失（缺失两个或以上位点）的患者占73.7%。1p四个位点的缺失细胞比例呈两两正相关关系（P值均=0.000）。同一患者不点位点可出现多种遗传学异常组合,如：缺失和缺失、缺失和正常、扩增和正常、缺失和扩增、扩增和扩增。（3）临床相关性分析显示1p12、1p13.3、1p21.2、1p32.3缺失和高LDH正相关（P=0.029,0.034,0.026,0.012）,1p21.2、1p32.3、1p13.3缺失和13q14缺失呈正相关（P=0.023,0.033,0.010）,1p12、1p13.3、1p21.2缺失和骨髓浆细胞比例升高呈正相关（P=0.009、0.003、0.001）,1p21.2、1p13.3和血β2微球蛋白升高呈正相关（P=0.019,0.042）。（4）沙利度胺组初治患者中,1p各位点缺失患者PFS和OS时间均明显缩短（P<0.05）,硼替佐米组患者,1p各位点缺失和无缺失患者PFS和OS时间无明显差异。硼替佐米能明显改善1p各位点缺失患者的近期疗效、明显延长1p21.2和1p32.3缺失患者的PFS和OS时间（P均<0.05）。（5）单因素分析显示高LDH、17p缺失和复杂核型为影响沙利度胺组初治患者PFS和OS的因素,将上述指标和1p缺失（至少存在1个或以上位点1P缺失）共同构建COX回归模型行多因素分析,结果1p和17p缺失为影响PFS的独立因素,而1p缺失为影响OS的独立因素。（6）复发/难治沙利度胺组患者,1p21.2缺失患者PFS和OS明显缩短（P=0.025,0.001）,1p13.3缺失患者OS明显缩短（P=0.003）,硼替佐米不能改善1p21.2缺失患者的PFS时间（P=0.258）,但能明显延长1p21.2缺失患者的OS时间（P=0.034）。（7）复发/难治患者组,单因素分析显示高LDH、髓外浸润是影响PFS和OS的因素,多因素分析显示1p21.2缺失和高LDH为影响PFS（P=0.024,0.001）和OS（P=0.019,0.019）的独立因素,而1p13.3缺失并非影响PFS和OS的独立因素。[结论]1.MM患者1号染色体短臂遗传学异常具有复杂性和多样化特点,以缺失为主,多表现为大片段缺失,少见扩增。2.不同疾病状态（初治、复发/难治、CR/VGPR和PR）MM患者1p各位点缺失率和缺失细胞比例无明显差异,sPCL患者1p13.3、1p21.2和1p32.3位点缺失率明显高于初治患者。1p四个位点缺失细胞比例呈明显两两正相关。3.1p各位点缺失患者多伴13q14缺失（1p13.3、1p21.2、1p32.3）,高LDH（1p12、1p13.3、1p21.2、1p32.3）、骨髓浆细胞比例≥50%（1p12、1p13.3、1p21.2）和高血清β2微球蛋白（1p21.2、1p13.3）4.沙利度胺初治组,1p各位点缺失患者PFS和OS均明显缩短。硼替佐米能改善1p21.2和1p32.3缺失患者的近期疗效,延长PFS和OS,克服其预后不良。1p13.3和1p12缺失的患者,硼替佐米能提高其近期疗效,至少部分延长这部分患者的PFS和OS。多因素分析显示1p和17p缺失为影响本组患者PFS的独立因素,而1p缺失为影响本组患者OS的唯一独立因素。5.复发难治沙利度胺组患者中,1p21.2和1p13.3提示预后不良,硼替佐米能克服lp21.2缺失患者预后不良,多因素分析显示1p21.2缺失和高LDH为影响本组患者PFS和OS的独立因素,而lp13.3缺失并非PFS和OS的独立影响因素。6.基于上述结果,对初治患者我们优先推荐检测lp21.2位点或1p21.2和1p32.3两位点联合检测。复发／难治患者,我们优先推荐检测1p21.2位点。[目的]：探讨不同疾病状态浆细胞肿瘤12p13.31位点的遗传学异常特点及其在多发性骨髓瘤（MM）患者中的预后意义。进一步补充和完善MM患者分子遗传学预后分层指标,为建立适合我国MM患者的预后分层标准和个体化治疗体系提供依据。[方法]：应用定位于12p13.31位点的CD27基因的BAC克隆制作FISH（荧光原位杂交）探针,对我院1999.8-2012.11确诊的265例初诊、90例复发/难治和64例治疗缓解（≥PR）MM患者,6例pPOL、8例sPCL和2例MGUS患者纯化的CD138+细胞行FISH检测。缺失细胞比例≥10%为缺失阳性。分析各种疾病状态患者12p13.31位点的遗传学异常特点,并结合临床和生存资料,分析12p13.31位点异常和临床指标的相关性及其对预后的影响。[结果]：（1）初治患者12p13.31位点缺失率为10.9%,复发/难治患者14.4%,PR患者10.5%, CR/VGPR患者5%, sPCL患者33.3%,8例pPCL和2例MGUS患者未检测到该位点缺失。不同疾病状态患者12p13.31位点缺失率无统计学差异（P值均>0.05）。部分MM患者存在12p13.31位点扩增,初治患者扩增率为4.5%,复发/难治患者为11.1%,复发/难治患者扩增率高于初治患者（P=0.025）。（2）临床相关性分析显示初治患者12p13.31缺失和多项高肿瘤负荷的临床指标呈正相关：Cr≥177μmol/L （P=0.038）、β2-mg≥5.5mg/dL （P=0.007）、ISS-Ⅲ期（P=0.009）、IL-2（P=0.000）、IL-4（P=0.012）和IL-6（P=0.012）因子水平升高。（3）沙利度胺初治组患者,12p13.31缺失患者PFS（12+4.33）和OS（12±7.34：）较12p13.31阴性患者（PFS：234-2.36；OS：37.5±7.37）明显更短（P=0.025,0.007）,硼替佐米组12p13.31缺失阳性和阴性患者PFS（14±5.06：24±5.46）和OS（23.5±3.75：54±18.35）无明显差别（P=0.324,0.151）,25例12p13.31阳性患者,使用硼替佐米治疗者中位PFS和OS分别为14±5.51和24±3.67个月,使用沙利度胺为基础的治疗者中位PFS和OS分别为12±4.32个月和12±7.34个月,两种治疗方案比较PFS和OS无显著性差异（P=0.672,0.411）,但25例12p13.31阳性患者中,硼替佐米组患者中位OS有所延长,获得VGPR以上疗效的患者比例更高（50%：23.1%）,我们认为硼替佐米可能部分延长这部分患者的OS时间和提高治疗缓解率。（4）12p13.31缺失合并高LDH（≥220U/L）、高β2-MG（≥5.5mg/dL）和病理性骨折患者,PFS和OS较单独12p13.31缺失、单独LDH或β2-MG升高或病理性骨折和无上述异常的患者更差,中位PFS仅为1.0,12.0和1.0个月（P=0.000,0.026,0.000）,中位OS为2.0,23.5和1.0个月（P=0.000,0.001,0.001）。（5）沙利度胺组初治患者,复杂核型、LDH≥220U/L、17p13缺失和12p13.31缺失的患者PFS（P=0.005,0.015,0.000,0.025）和OS（P=0.001,0.003,0.001,0.007）分别较无上述异常的患者缩短,多因素分析显示12p13.31缺失不是影响本组患者PFS和OS的独立因素,而17p13缺失是影响该组患者PFS（HR：6.743,95.0%CI:2.055-22.123,P=0.002）和OS（HR：3.989,95.0%CI：1.218-13.06,P=0.022）的唯一独立因素。未发现影响硼替佐米组患者PFS和OS的独立因素。（6）复发/难治患者中,未发现和12p13.31缺失相关的临床指标,生存分析显示,沙利度胺组患者,12p13.31缺失阳性患者中位PFS为4.5±2.619个月,较阴性患者（14±2.874）明显缩短（P=0.009）,两组患者OS无差别。硼替佐米组患者,12p13.31缺失阳性和阴性患者PFS和OS无明显差别（P=0.244,0.510）。多因素分析显示高LDH是影响复发/难治患者PFS的独立因素,而髓外浸润、高LDH是影响OS的独立因素。（7）在初治MM患者中,未发现12p13.31扩增和临床指标的相关性及其预后意义。[结论]1.MM患者12p13.31位点既可出现缺失,也可出现扩增,以缺失为主,初治和复发/难治患者12p13.31位点缺失率无差别,但复发/难治患者12p13.31位点扩增率高于初治患者。2.12p13.31缺失和多项反映肿瘤负荷的临床指标呈正相关：Cr≥177μmol/L、 β2-mg≥5.5mg/dL、ISS-Ⅲ期、IL-2、IL-4和IL-6因子水平升高。3.沙利度胺组初治患者中,12p13.31缺失的患者PFS和OS较无缺失患者明显更短,但多因素分析提示其并非影响PFS和OS的独立因素,17p13缺失是影响本组患者PFS和OS的唯一独立因素。4.12p13.31缺失伴β2-mg≥5.5mg/dL、LDH≥220U/L和病理性骨折的患者预后较单独12p13.31缺失、单独LDH升高或病理性骨折和无上述异常的患者更差。5.复发/难治患者中,12p13.31缺失的患者PFS较无缺失患者明显缩短,OS无明显差异,12p13.31缺失在复发/难治患者中的预后意义不如初治患者明显。6.硼替佐米可能部分延长12p13.31缺失患者的OS时间和提高治疗缓解率。7.12p13.31扩增的临床和预后意义不大,可能和复发/难治患者更易出现细胞遗传学紊乱有关。