论文摘要
第一章腺病毒介导GPX基因转染对香烟烟雾提取物所致血管内皮细胞氧化/抗氧化失衡及凋亡的影响目的探讨腺病毒介导GPX基因转染对香烟烟雾提取物（CSE）致血管内皮细胞氧化损伤和凋亡的影响。方法体外培养人脐静脉内皮细胞株（ECV304）,取对数生长期细胞用于实验。予0、30、50、70感染倍数（MOI）的腺病毒连接LacZ（Ad-LacZ）转染ECV304,观察其转染率。予0%、5%、10%CSE干预ECV304 24h及10%CSE干预0、6、12、24h,分别观察其凋亡指数（AI）。将ECV304分为四组培养,分别予0%CSE（空白组）、10%CSE（CSE组）、LacZ+10%CSE（LacZ组）、GPX转染+10%CSE（GPX组）干预。收集各组干预24h后细胞爬片及上清液,硫代戊巴比妥酸法测上清液MDA浓度,黄嘌呤氧化酶法测SOD活力,TUNEL法检测细胞AI。结果1.70MOI的Ad-LacZ转染率高达（93.3±2.9）%。2.10%CSE干预ECV304 24h后,其AI高于0%及5%CSE干预组,差异有统计学意义（p均＜0.05）。10%CSE干预ECV304 24h后,其AI高于0h、6h和12h组,差异有统计学意义（p均＜0.05）。3.10%CSE干预ECV304 24h后,与空白组比较,其上清液中MDA浓度增加,SOD活力降低,且AI增加,差异有统计学意义（p均＜0.05）。4.腺病毒介导的GPX基因转染后的ECV304,经10%CSE干预24h后,与CSE组及LacZ组比较,其上清液中MDA浓度降低,SOD活力增加,AI降低,差异有统计学意义（p均＜0.05）。5.所有四组细胞培养上清液中MDA浓度与AI呈正相关（r=0.913,p＜0.05）,SOD活力与AI呈负相关（r=-0.660,p＜0.05）。结论1.CSE能导致内皮细胞氧化/抗氧化失衡及凋亡,其致凋亡作用呈时间及浓度依赖性。2.腺病毒介导GPX基因转染可以部分抑制CSE致内皮细胞氧化/抗氧化失衡及凋亡作用。3.ECV304氧化/抗氧化失衡与凋亡程度相关。第二章烟雾暴露所致大鼠慢性阻塞性肺疾病模型中肺泡间隔细胞凋亡及N-乙酰半胱氨酸干预的影响目的探讨N-乙酰半胱氨酸（NAC）对烟雾暴露所致大鼠慢性阻塞性肺疾病（COPD）模型肺功能、肺气肿程度、肺泡间隔细胞凋亡及血管内皮生长因子（VEGF）、血管内皮生长因子受体2（VEGFR2）表达的影响。方法48只大鼠随机分为正常对照组、COPD组、假干预组和NAC干预组各12只。烟雾暴露法建立COPD模型,熏烟30天后假干预组每天予生理盐水灌胃,NAC干预组每天予NAC灌胃。建模80天后观察肺组织形态学变化,定量测定肺平均内衬间隔（MLI）和平均肺泡数（MAN）,用小动物肺功能仪测定系统测定肺功能,TUNEL法检测肺泡间隔细胞凋亡指数（AI）,硫代戊巴比妥酸法测定血清及支气管肺泡灌洗液（BALF）中丙二醛（MDA）含量,黄嘌呤氧化酶法测总超氧化物歧化酶（T-SOD）、锰超氧化物歧化酶（MnSOD）含量,计数BALF中白细胞总数、中性粒细胞和巨噬细胞数及其百分比,ELISA法测定BALF中VEGF浓度,Western blotting法测定肺组织VEGF、VEGFR2含量。结果1.COPD组及假干预组造模中大鼠出现一般情况异常,NAC干预组大鼠表现类似COPD组但程度较轻。2.COPD组及假干预组大鼠肺组织呈现肺气肿病理改变,NAC干预组病理变化相对减轻。3.COPD组大鼠MLI高于正常对照组,MAN低于正常对照组,NAC干预组MLI低于COPD组和假干预组,MAN高于COPD组和假干预组,差异均有统计学意义（p均＜0.05）。4.COPD组FEV0.3/FVC和PEF较正常对照组降低,NAC干预组FEV0.3/FVC和PEF高于COPD组及假干预组,差异均有统计学意义（p均＜0.05）。5.COPD组肺泡间隔细胞AI高于正常对照组,NAC干预组肺泡隔细胞AI低于COPD组和假干预组,但高于正常对照组,差异有统计学意义（p均＜0.05）。6.血及BALF中MDA浓度COPD组高于正常对照组,NAC干预组低于COPD组及假干预组,差异均有统计学意义（p均＜0.05）。7.COPD组T-SOD、MnSOD活力均低于正常对照组,NAC干预组均高于COPD组及假干预组,差异均有统计学意义（p均＜0.05）。8.COPD组、假干预组和NAC干预组BALF中白细胞总数、巨噬细胞百分比及其绝对值、中性粒细胞百分比及其绝对值均高于正常对照组,差异有统计学意义（p均＜0.05）;NAC干预组BALF中白细胞总数、巨噬细胞绝对值、中性粒细胞绝对值低于COPD组及假干预组,差异有统计学意义（p均＜0.05）。9.COPD组、假干预组及NAC干预组BALF中VEGF浓度均低于正常对照组,而NAC干预组高于COPD组和假干预组,差异均有统计学意义（p均＜0.05）。10.Western blotting结果显示:COPD组及假干预组VEGF、VEGFR2表达均较正常对照组降低,而NAC干预组较COPD组及假干预组增高。11.所有大鼠BALF中VEGF浓度与肺泡间隔细胞AI呈负相关（r=-0.731,p＜0.05）。结论1.烟雾暴露法成功建立大鼠COPD模型,该模型存在肺泡间隔细胞凋亡增加现象。2.烟雾暴露所致大鼠COPD模型存在气道炎症、氧化/抗氧化失衡和肺泡间隔细胞凋亡。3.NAC可部分抑制烟雾暴露所致大鼠COPD模型体内氧化/抗氧化失衡、气道炎症及肺泡间隔细胞凋亡。4.NAC可部分预防烟雾暴露所致大鼠COPD模型肺内VEGF分泌减少及VEGFR2表达下调,从而降低肺泡间隔细胞凋亡,并最终改善烟雾暴露所致大鼠肺功能损害并减轻肺气肿程度。
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