小豆再生体系建立及铁吸收基因转化条件初步分析

论文摘要

小豆再生体系建立是小豆基因功能分析和转基因研究的基础。本文以保278、P254、京农5号、京农6号、京农8号、吉红9号6个小豆品种为材料,对其再生能力进行研究,在此基础上,以京农5号小豆无菌苗下胚轴为外植体,建立了优化的遗传转化体系。取得了如下结果:1.通过对6个小豆品种再生能力的比较,筛选出再生能力优良、再生频率较高的京农5号,再生频率达到82.5%。2.建立了小豆再生体系,研究了外植体类型、苗龄和激素浓度对京农5号小豆丛生芽诱导率的影响,得出最佳外植体是下胚轴,最适苗龄为5天,最佳丛生芽诱导培养基为MS+2 mg/L 6-BA+7 g/L琼脂+30g/L蔗糖。3.初步建立了小豆遗传转化体系,以培养5-6天的京农5号小豆无菌苗下胚轴为外植体,以农杆菌菌株为介体,初步分析了农杆菌介导法转化调控铁吸收基因的适宜条件,优化的基因转化体系如下:Hyg筛选浓度定为25mg/L,抑菌剂选取羧苄青霉素为宜,最初脱菌阶段（一周）浓度为300mg/L,丛生芽诱导阶段浓度为200mg/L;用于转化的浸染时间为15min,菌液浓度OD600=0.3～0.5,外植体预培养时间为2天,共培养3天,乙酰丁香酮浓度为100 mg/L有利于转化。经筛选,得到6株抗Hyg的京农5号转化植株。其中2株经PCR检测,表现为假阳性。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 文献综述
• 1 豆科植物组织培养和再生体系建立研究进展
• 2 铁的生理功能及在土壤中的存在形式和吸收模式
• 2.1 铁的生理功能及作用
• 2.2 铁在土壤中的存在形式及对植物的有效性
• 2.3 植物适应铁胁迫的吸收模式
• 3 铁吸收相关基因
• 3.1 铁还原酶基因（ FRO ,ferric reduction oxidase）
• 3.2 铁转运蛋白基因
• 3.3 调控铁吸收基因
• 4 植物遗传转化研究
• 4.1 植物遗传转化方法
• 4.2 报告基因和选择标记基因
• 4.3 转化体的筛选与检测
• 5 小豆基因工程的应用
• 第二章 小豆再生体系的建立
• 1 材料和方法
• 1.1 材料
• 1.2 方法
• 2 结果与分析
• 2.1 不同小豆品种丛生芽再生能力比较
• 2.2 苗龄对京农5 号小豆下胚轴再生能力的影响
• 2.3 激素浓度对京农5 小豆下胚轴诱导丛生芽的影响
• 3 小结与讨论
• 3.1 苗龄对丛生芽诱导率的影响
• 3.2 培养基中激素浓度的选择
• 3.3 外植体的选择
• 第三章 农杆菌介导的AtbHLH38 基因转化小豆研究
• 1 材料和方法
• 1.1 材料
• 1.2 试验方法
• 2 结果与分析
• 2.1 潮霉素（Hyg）浓度对丛生芽诱导率的影响
• 2.2 抗生素种类及其浓度的确定
• 2.3 农杆菌浓度对转化率的影响
• 2.4 侵染时间对转化率的影响
• 2.5 预培养时间对转化率的影响
• 2.6 乙酰丁香酮浓度对转化率的影响
• 2.7 共培养时间对转化率的影响
• 2.8 转化植株的PCR 检测
• 3 小结与讨论
• 3.1 抗生素的选择
• 3.2 转化体的选择
• 3.3 农杆菌菌株对转化的影响
• 3.4 侵染时间、菌液浓度及共培养时间对转化的影响
• 3.5 关于PCR 检测
• 3.6 存在问题
• 参考文献
• 附表MS 培养基配方
• 图板
• 致谢
• 个人简介
• 导师简介