论文摘要
目的:急性白血病是血液系统常见的恶性疾病,大部分患者经过传统化疗后能获得仞始的的缓解,但即使进行现代大剂量化疗和造血干细胞移植,仍有相当部分的病人难免最终复发。骨髓微小残留病被认为是复发的根源,而残留的白血病细胞的生存离不开骨髓造血微环境的支持,造血微环境异常可能参与了微小残留病的形成,因此改造骨髓造血微环境可能成为治疗急性白血病的新策略。基质细胞衍生因子-1（stromalcell derived factor-1,SDF-1）主要由骨髓基质细胞合成和分泌,是骨髓造血微环境的重要组成部分。人SDF-1基因定位于10号染色体,根据其编码氨基酸序列归属于趋化因子CXC亚家族,通过与造血干细胞和血液肿瘤细胞上其受体CXCR4结合,不仅在细胞的迁移和定位中发挥重要作用,而且影响瘤细胞的扩增。有报道通过应用受体阻断剂能抑制瘤细胞生存,但抑制骨髓基质细胞表达SDF-1对急性白血病细胞有什么影响目前还不清楚。我们通过观察RNA干扰抑制急性白血病骨髓基质细胞表达SDF-1对共培养的急性白血病Jurkat细胞的影响,探索通过改造骨髓造血微环境清除微小残留病治疗急性白血病的途径。 方法:参照Dexter法分离培养完全缓解1年内的急性白血病骨髓基质细胞,ELISA法检测培养上清中SDF-1含量,脂质体介导SDF-1特异性RNA干扰质粒转染骨髓基质细胞,G418筛选阳性混合克隆（命名为SC1）,RT-PCR及ELISA法检测RNA干扰后骨髓基质细胞SDF-1mRNA和蛋白表达水平,以转染对照质粒骨髓基质细胞（命名为SC2）和未转染的骨髓基质细胞（命名为SC3）作为对照。Jurkat细胞与急性白血病骨髓基质细胞共培养,与转染RNA干扰质粒抑制SDF-1表达的骨髓基质细胞共培养的Jurkat细胞作为实验组（A组）,与未转染的骨髓基质细胞共培养的Jurkat细胞作为对照组（B组）。通过检测Jurkat细胞的黏附、细胞增殖、细胞周期、细胞凋亡、PCNA,Bcl-2,Bax,Fas,FasL的表达及药物敏感性的变化,评估RNA干扰抑制SDF-1表达的作用。细胞黏附和细胞增殖试验采用细胞计数法检测,细胞周期、细胞凋亡、PCNA,Bcl-2,Bax,Fas,FasL的表达、药物敏感性试验分别采用流式细胞术、TdT介导的dUTP缺口末端标记（TUNEL）法、免疫细胞化学、MTT法检测。
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