深海热液口管状蠕虫Ridgeia piscesae溶菌酶基因的体外表达与活性分析

深海热液口管状蠕虫Ridgeia piscesae溶菌酶基因的体外表达与活性分析

论文摘要

Ridgeia piscesae,是生活在深海热液口极端环境下(northeast Pacific Juan deFuca Ridge)的一种古老的后生动物,在本实验中,我们克隆了两种溶菌酶基因,分别命名为Rplyso-A(26.1 KDa)和Rplyso-B(25.8 KDa),二者的氨基酸序列相似度高达77.27%,通过序列比对以及系统发生分析,将这两种来自蠕虫的溶菌酶归为ⅰ型溶菌酶家族,它们序列中一个明显的特征就是含有高比例的半胱氨酸(29个),表明了二硫键可能在维持这种蛋白稳定方面发挥重要作用。另外,体外表达的Rplyso-A与Rplyso-B具有溶菌酶、异肽酶和抗菌活性,RT-PCR显示Rplyso-A与Rplyso-B基因主要在与vestimentum和trophosome中表达,而在plume或opisthosome中则没有表达,我们认为,这两种溶菌酶可能在蠕虫体内起相互辅助的消化作用。

论文目录

  • 摘要
  • ABSTRACT
  • 第1章 绪论
  • 1.1 溶菌酶的发现及其生物学功能
  • 1.2 深海热液口生态系统的特征
  • 1.3 热液口管状蠕虫
  • 1.4 本论文研究目的及意义
  • 第2章 材料与方法
  • 2.1 材料
  • 2.2 基本方法
  • 2.3 管状蠕虫R.piscesae溶菌酶基因的体外表达与活性分析
  • 第3章 结果分析
  • 3.1 深海热液口管状蠕虫R.piscesae溶菌酶基因的克隆与序列分析
  • 3.2 种群分析
  • 3.3 管状蠕虫R.piscesae溶菌酶基因的克隆表达与蛋白纯化
  • 3.4 酶学活性测定
  • 3.5 RT-PCR
  • 第4章 讨论
  • 4.1 管状蠕虫R.piscesae溶菌酶基因的表达问题
  • 4.2 管状蠕虫R.piscesae拥有两种溶菌酶基因
  • 第5章 结论与展望
  • 5.1 结论
  • 5.2 进一步工作的方向
  • 致谢
  • 参考文献
  • 攻读学位期间的研究成果
  • 相关论文文献

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