论文摘要
目的:克隆人特异性抗蛋白酶保护因子 Elafin 基因 cDNA,构建该基因的真核表达载体;观察其在肺上皮细胞中的表达情况,为研究Elafin 作为天然内生抗菌多肽的应用提供技术基础。 方法:（1）抽提人肺总 RNA 进行逆转录反应,经 PCR 扩增目的片段,将其克隆于 pUCm-T 载体上,经酶切电泳、DNA 测序鉴定分析;定向亚克隆到绿色荧光蛋白表达载体 pEGFP-N1,并经酶切电泳、DNA 测序鉴定分析构建是否成功。（2）将 pEGFP-N1-elafin 转染到肺上皮细胞 A549 中,荧光显微镜观察其在细胞中表达及定位,并采用特异的cRNA 探针和抗 Elafin 单抗行 Northern 杂交和 ELISA 检测,分别从转录及蛋白质水平来分析其表达情况。 结果:（1）经 RT-PCR 获得 377bp 的产物,经酶切、DNA 测序,确定所扩增片段为人 Elafin 基因 cDNA,进而成功筛选出表达载体pEGFP-N1-elafin。（2）转染后的肺上皮细胞中有 Elafin 基因表达,同时细胞培养上清液检测到 Elafin。 结论:获得编码 Elafin 的基因片段,并成功构建了真核表达载体pEGFP-N1-elafin。在其转染的肺上皮细胞中有 Elafin 基因表达,且证实其主要是由培养细胞呈分泌性表达。Elafin 基因 cDNA 真核表达载体的成功构建以及主要呈分泌性表达的特点显示了极具意义的潜在应用价值。
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- [1].角质形成细胞生长因子对肺上皮细胞的保护与修复作用[J]. 儿科药学杂志 2010(06)
- [2].转化生长因子-β1诱导人肺上皮细胞E-钙黏蛋白表达的变化[J]. 苏州大学学报(医学版) 2009(03)
- [3].不同质量浓度脂多糖对人肺上皮细胞活性的影响[J]. 中国药业 2018(13)
- [4].肺上皮细胞与巨噬细胞来源的胞外囊泡在肺部炎症及损伤中的作用[J]. 中华重症医学电子杂志(网络版) 2020(02)
- [5].百草枯诱导肺上皮细胞上皮-间充质转变机制的研究进展[J]. 临床急诊杂志 2017(11)
- [6].大气污染细颗粒中有机成分苯并芘直接引起人Ⅱ型肺上皮细胞慢性炎症[J]. 中国病理生理杂志 2015(10)
- [7].呼吸道合胞病毒感染人肺上皮细胞一氧化氮的产生及其作用[J]. 微生物学通报 2009(05)
- [8].重组高迁移率族蛋白B1对肺上皮细胞细胞因子释放的影响及其机制[J]. 南京医科大学学报(自然科学版) 2012(05)
- [9].慢性阻塞性肺疾病患者肺组织中自噬相关基因和蛋白的表达[J]. 上海医学 2017(02)
- [10].广佛手对脂多糖诱导的人肺上皮细胞炎症细胞因子调控的影响[J]. 中医药学报 2018(05)
- [11].低剂量黑碳诱发人肺上皮细胞的毒性效应及其氧化损伤[J]. 阜阳师范学院学报(自然科学版) 2020(02)
- [12].脂多糖及缺氧诱导肺上皮细胞释放高迁移率族蛋白B1的研究[J]. 中华医院感染学杂志 2012(11)
- [13].人肺上皮细胞感染呼吸道合胞病毒后核内活性因子κB与诱导型一氧化氮合酶的表达[J]. 中国组织工程研究与临床康复 2008(15)
- [14].羧甲基壳聚糖对人肺上皮细胞短路电流影响的研究[J]. 山西医药杂志 2013(03)
- [15].口腔细菌对铜绿假单胞菌黏附及侵入肺上皮细胞能力的影响[J]. 中国微生态学杂志 2012(10)
- [16].半夏生物碱对肺上皮细胞炎症损伤的保护作用研究[J]. 内蒙古农业大学学报(自然科学版) 2018(04)
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- [19].肺上皮细胞自噬体在结核分枝杆菌感染中保护作用的分子机制[J]. 现代生物医学进展 2011(21)
- [20].SIRT1对肺炎链球菌感染肺上皮细胞诱导LL-37表达的调控机制[J]. 中国现代医生 2018(11)
- [21].OGG1对PM2.5造成人肺上皮细胞DNA损伤的修复作用[J]. 现代医院 2015(08)
- [22].铜绿假单胞菌外膜囊泡对肺上皮细胞分泌细胞因子的影响[J]. 深圳中西医结合杂志 2019(22)
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- [24].SLPI对脂多糖诱导人肺上皮细胞中SP-D表达的影响[J]. 江苏医药 2015(24)
- [25].EGFR信号通路在SiO_2诱导肺上皮细胞间质转化中的作用机制(英文)[J]. 现代生物医学进展 2014(19)
- [26].压块燃料燃烧排放PM_(2.5)对人体肺上皮细胞的毒性研究[J]. 环境经济 2018(05)
- [27].LPA2受体介导LPA诱导的人支气管肺上皮细胞PAI-1表达[J]. 热带医学杂志 2010(08)
- [28].细胞出版社2016中国年度论文[J]. 科学新闻 2017(04)
- [29].基于转录组测序探究PM2.5损伤肺上皮细胞BEAS-2B的相关机制[J]. 天津医药 2020(01)
- [30].人参皂苷Rg_1对LPS诱导的肺上皮细胞凋亡和自噬的影响[J]. 中国中药杂志 2019(08)