论文摘要
本研究着重对水牛卵母细胞体细胞核移植的方法及影响因素进行了探讨。 1.水牛卵母细胞体外成熟22h后,分别用盲吸法、点击法和纺锤体成像系统（Spindle-View）去核。结果发现,三者的去核率分别为65.1%、81.8%和95.0%,差异极显著（P<0.01）;以水牛胎儿成纤维细胞为供体,采用带下注核电融合法核移植构建的重构胚的融合率、分裂率和囊胚发育率,没有显著差异（P>0.05）。由此说明,点击法是一种较为简单、实用和有效的去核方法。 2.探讨了反向核移植应用于水牛体细胞核移植的效果。结果显示,反向核移植可支持重构胚发育到囊胚,但其构建重构胚的效率极显著低于电融合法（54.0%比75.1%,P<0.01）,囊胚发育率也显著低于电融合法（6.9%比15.9%,P<0.05）。 3.探讨了水牛体细胞连续核移植的效果。连续核移植与原代核移植的分裂率和囊胚率没有显著差异（P>0.05）。说明连续核移植能否作为提高水牛体细胞核移植效率的一种手段尚需进一步研究。 4.建立了水牛完整供体细胞胞质内注核的核移植方法。水牛完整供体细胞胞质内注核法核移植构建重构胚的效率显著高于电融合法核移植（87.1%比81.1%,P<0.05）,重构胚的分裂率显著低于后者（49.5%比71.8%,P<0.01）,但二者的囊胚率和核移植的效率没有显著差异（21.6%比19.3,P>0.05;18.8%比15.7%,P>0.05）。由此说明,完整供体细胞胞质内注核法核移植可作为研究水牛体细胞核移植的一种新方法。 5.探讨了水牛完整供体细胞胞质内注核后与激活前的时间间隔对核移植效果的影响。研究发现,除了以卵丘细胞为供体细胞构建的重构胚在激活前培养1.5h的分裂率显著低于其在激活前培养3h和5h外
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