论文摘要
目的观察家兔烫伤后金黄色葡萄球菌脓毒症模型外周血中性粒细胞（polymorphonuclear neutrophils，PMN）蛋白质组的变化，从PMN细胞整体蛋白质水平探讨烫（烧）伤脓毒症的病理生理机制，为临床诊治烫（烧）伤脓毒症提供依据。方法实验分4组：假烫伤组、烫伤组、烫伤脓毒症2小时组及烫伤脓毒症6小时组，每组3只家兔。后两组于烫伤后24小时经耳静脉注射对数生长期金葡菌（标准株ATCC25923），然后分别于2小时、6小时后经颈动脉插管取血。单纯烫伤及假烫伤组于伤后或假烫伤处理后24小时取颈动脉血。分离PMN，运用蛋白质组学技术提取PMN细胞总蛋白，利用固相pH梯度（IPG）及SDS—PAGE二维凝胶电泳分离PMN细胞总蛋白，考马斯亮蓝染色、Imagescanner扫描、PDQuest软件图象分析找出差异表达蛋白质点，应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MADI-TOF-MS）分析及Mascot查询软件、NCBI、MSDB数据库鉴定特征性差异蛋白。结果1)每组3张胶上表达的蛋白质点数分别为759±20、749±27、753±33、723±19个；平均匹配率分别为93％、91％、93％、90％；等电聚焦（IEF）方向位置偏差分别为0.80±0.29、0.75±0.43、0.86±0.23、0.69±0.15mm；SDS—PAGE方向位置偏差分别为1.1±0.37、1.2±0.46、1.5±0.31、1.3±0.22mm。各组平均胶之间匹配率为81％～100％。2)筛选出差异表达蛋白质点19个，进行质谱分析质谱峰信噪比均高，经查询蛋白质序列数据库鉴定了9个蛋白质点，对应7种蛋白质，分别为二硫键异构酶前体、膜联蛋白-Ⅰ、膜联蛋白-Ⅱ、肌动蛋白β、巯基特异抗氧化蛋白、硫氧还蛋白及假定蛋白，其中二硫键异构酶前体和膜联蛋白-Ⅰ各有2种异构体。3)图象分析发现在鉴定出的蛋白质中，烫伤组与假烫伤组比较除膜联蛋白-Ⅰ和肌动蛋白β表达上调外，其余几种蛋白均下调，二硫键异构酶前体在烫伤组的表达量约为假烫伤组的1／100，硫氧还蛋白在烫伤组表达量接近于零。这7种蛋白的表达量在烫伤和脓毒症不同时相组3组之间两两比较有差异但比烫伤组与假烫伤组之间的差异小（比值为0.22～13.14）。结论1)本研究建立了图象清晰、分辨率高、重复性好的家兔烫伤脓毒症PMN细胞蛋白质固相pH梯度2—DE图谱，为烫（烧）伤脓毒症PMN细胞2—DE图谱数据库的建立提供了数据资料。2)假烫伤组、烫伤组和烫伤脓毒症组家兔PMN细胞蛋白质表达具有差异，这些蛋白质的差异表达可能使PMN趋化、吞噬、杀菌功能降低，滞留于微循环引起内皮和器官组织损伤，促发SIRS和脓毒症，对早期诊断烫（烧）伤脓毒症可能具有分子标记意义，为脓毒症临床治疗新途径的开辟提供了新线索。