20-HETE在血管紧张素Ⅱ引起的心肌细胞凋亡中的作用研究

论文摘要

20-羟二十烷四烯酸（20-hydroxyeicosatetraenoic?acid,2?0-HETE）是细胞色素P450?（Cytochrome?P450,CYP450）ω-羟化酶催化花生四烯酸（arachidonic?acid,AA）代谢所生成的产物。它是一种潜在的血管收缩剂,在肾、脑动脉和心脏的冠脉循环中起作用,它可以调节? AngII、加压素和去甲肾上腺素的血管收缩反应。本实验室的前期研究结果显示? 20-HETE?能够引起乳鼠心肌细胞的的凋亡反应,在此研究基础上,发现由?AngII引起的心肌细胞凋亡,能够被20-HETE合成酶抑制剂HET0016?所抑制,这显示?AngII引起的心肌细胞凋亡可能被20-HETE所介导。方法及结果如下:1)通过流式细胞仪技术检测发现,HET0016?能够显著抑制由?AngII?引起的心肌细胞凋亡率的提高。与对照组相比,经过AngII（100?nM）处理后的心肌细胞的存活率显著降低,而凋亡细胞的比率则明显升高,凋亡细胞的比率约达到?35.4±8.5%;HET0016显著的抑制了AngII引起的心肌细胞凋亡率的提高,使?AngII?引起的凋亡细胞的比率下降到?14.9±2.6%。2)利用激光共聚焦显微镜,以?JC-1?为荧光探针检测发现,HET0016能够显著抑制由AngII引起的心肌细胞线粒体膜电位的下降;3)利用分光光度法和Hoechst?染色发现,HET0016能够显著的抑制AngII?引起的Caspase-3活性的升高,并能够降低?AngII引起的细胞核凋亡反应的发生;4?)?RT-PCR?和?Western? blot?实验证实?AngII?能够诱导?20-HETE?合成酶亚型?CYP4A1?和?CYP4A3?的? mRNA?的表达,也能够提高? CYP4A?蛋白的表达。上述研究均表明?20-HETE可能介导了AngII引起的细胞凋亡反应。这将为?AngII引起的心脏疾病的治疗提供一定的理论依据。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 引言
• 材料和方法
• 1.实验材料
• 1.1 实验动物
• 1.2 实验仪器
• 1.3 试剂及药品
• 2.实验方法
• 2.1 乳鼠心肌细胞的原代培养
• 2.2 心肌细胞凋亡率的测定
• 2.3 心肌细胞线粒体膜电位DΨm 检测
• 2.4 Hoechst33342 染色检测细胞凋亡
• 2.5 caspase-3 活性测定
• 2.6 RT-PCR（逆转录聚合酶链式反应）检测 CYP4A1 和 CYP4A3 的表达
• 2.7 western blot 蛋白免疫印迹法检测 CYP4A 蛋白的表达
• 2.8 统计学方法
• 实验结果
• 1. 20-HETE 合成酶抑制剂 HET0016 对 ANGII 引起的心肌细胞凋亡的抑制作用
• 2. 20-HETE 合成酶抑制剂 HET0016 对 ANGII 引起的心肌细胞线粒体膜电位DΨM 下降的抑制作用
• 3. HET0016 对 ANGII 作用的心肌细胞 CASPASE-3 活性的影响
• 4. HET0016 对 ANGII 作用的心肌细胞核的影响
• 5.ANGII 对 20-HETE 合成酶各亚型的 MRNA 表达的影响
• 6.ANGII 对 20-HETE 合成酶蛋白表达的影响
• 讨论
• 结论
• 创新点
• 参考文献
• 英文缩写
• 致谢