Neuritin的组织表达分析及其相互作用因子的筛选

论文摘要

neuritin是1993年以色列科学家Nedivi等人,从大鼠海马齿状脑回cDNA文库中,发现的一种神经营养因子。研究发现Neuritin蛋白能促进神经突起的生长及其分支和突触的发育成熟,调节突触回路的形成;在神经系统以及神经可塑性相关的区域,neuritin表达水平较高,且神经活动和NTs均能诱导其表达,提示神经活动和NTs促进神经突起生长的作用,可能与neuritin的表达有关。。目的:本研究旨在进一步明确Neuritin蛋白的组织分布、亚细胞定位;并寻找与之相互作用的蛋白,为深入探讨其功能及作用机制奠定理论基础,并为Neuritin在神经系统疾病防治的应用提供理论依据。方法:采用生物信息学手段,分析neuritin基因及蛋白的结构和可能的功能,并进行了基因表达串联分析（Serial Analysis of Gene Expression,SAGE）;从人类cDNA文库中扩增出neuritin的开放阅读框,用RT-PCR和免疫组织化学的方法对neuritin进行组织表达谱分析;构建pEGFP-C1-neuritin绿荧光蛋白Neuritin融合表达载体,结合免疫组织化学的方法对neuritin进行亚细胞定位;利用Gal4酵母双杂交系统,以neuritin作诱饵从人胎脑cDNA文库中,筛选与之相互作用的蛋白。结果:1)用生物信息学手段较全面的分析了neuritin核酸及蛋白的结构和可能的功能、组织分布;2)neuritin组织表达谱分析:MTC Panel和免疫组化分析结果均显示:Neuritin蛋白在多种人体正常组织中表达,尤其在脑组织神经节细胞和肝脏中高度表达; 3) Neuritin与GFP的融合蛋白,荧光定位为胞浆,与免疫组化结果一致,即Neuritin蛋白可以在胞浆分布,但不排除膜蛋白的可能。4)酵母双杂交实验:利用Gal4酵母双杂交系统,以neuritin作诱饵从人胎脑cDNA文库中,筛选得到59条与Neuritin蛋白有相互作用的蛋白质的基因,并进行了初步分类和分析。结论:1) MTC Panel组织表达谱实验、多组织免疫组化结果以及SAGE分析均表明:Neuritin蛋白除了脑组织高度表达外,在人体心、肝、肺、小肠以及卵巢等多种正常组织也有表达,提示:Neuritin蛋白在成年期可能不仅仅在中枢神经系统发挥作用。2)通过绿荧光定位和免疫组化的结果证实:Neuritin蛋白为胞浆定位,但不排除膜蛋白的可能。3)酵母双杂交结果显示:Neuritin分别与神经相关、与肿瘤相关以及与信号转导相关的蛋白质有相互作用。提示:Neuritin蛋白可能除了与神经可塑性有关,还可能与细胞增殖以及肿瘤有关。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 英文缩略词
• 前言
• 材料和方法
• 1 材料与试剂
• 2 方法
• 结果
• 1 人类NEURITIN 基因的生物信息学分析
• 2 MTC PANEL 组织表达谱分析
• 3 EGFP 绿荧光蛋白定位
• 4 免疫组化实验（S-P 法）
• 5 酵母双杂交筛选与NEURITIN 相作用的蛋白
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 文献综述
• 致谢
• 作者简历
• 攻读学位期间发表论文
• 导师评语