论文摘要
目的 1、建立和完善小鼠骨髓间充质干细胞（bone mesenchymal stem cells，BMSCs）的体外培养体系，最大限度地获得BMSCs。2、建立BMSCs的体外诱导分化模型。3、探讨氟化钠和酒精对间充质干细胞的毒性作用的机制，从而为防治氟骨病和酒精引起的股骨头坏死、骨质疏松等损伤机制研究提供科学依据。 方法 1、无菌取C57／BL6小鼠骨髓，用全骨髓培养方法体外扩增BMSCs，免疫组织化学染色鉴定BMSCs的阳性表面标志物CD90和阴性表面标志物的CD34，绘制细胞的生长曲线。2、以含地塞米松、β-磷酸甘油钠和维生素C的a-MEM培养液诱导BMSCs向成骨细胞方向分化，分别于不同时间收获细胞进行成骨细胞的早、中、晚期指标鉴定。以含地塞米松和胰岛素的a-MEM培养液诱导BMSCs向脂肪细胞方向分化，油红O染色鉴定脂肪细胞。3、分别用含不同浓度的NaF、Et和Ach的基础培养液染毒细胞，3天后收获细胞行MTT试验、c-fos免疫组织化学染色检测毒物对细胞的毒性；分别用含NaF、Et或Ach的成骨诱导培养液染毒细胞，于3，8，15天后分别行ALP含量测定，VEGF、TAZ、OPG、Collagen type Ⅰ、PPAR γ
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