论文摘要
J-蛋白是一类包含J-结构域的蛋白质,其中一些成员具有分子伴侣或热激蛋白的功能。拟南芥中存在94种J-蛋白,如此多的J-蛋白的存在预示它们可能在植物的生命活动中发挥重要的功能。此前关于J-蛋白的研究主要集中在分子伴侣功能方面,它们在生长发育及抗逆方面的功能目前报道较少。AtJ50是拟南芥J-蛋白家族中的一员,基因组序列分析显示AtJ50可以被分泌到胞外。关于AtJ50的组织定位、亚细胞定位以及在生长发育和环境胁迫中功能的研究尚未见报道。本项目以拟南芥野生型和T-DNA插入突变体为材料,对拟南芥AtJ50基因的表达特性及在生长发育和环境胁迫中的功能做了一个初步的探讨。通过半定量PCR的方法检测了AtJ50基因在植株不同器官中的表达,发现AtJ50基因在叶和花中表达最高,根和茎中次之,果中表达最弱。通过半定量PCR的方法检测了AtJ50基因在不同发育时期叶中的表达,结果表明AtJ50基因在不同发育时期都有表达,但是随着植株的衰老表达明显减弱。筛选了2个不同T-DNA插入位点的AtJ50基因的纯合突变体,鉴定结果显示,在2个突变体中T-DNA都是单拷贝插入的,且都未能检测到AtJ50基因的完全转录本,表明2个突变体中AtJ50基因的确已被敲除,可用于后面功能的研究。对AtJ50突变体进行了生长发育过程中表型的观察,结果显示突变体植株与野生型植株在莲座生长、茎高及生长发育进程方面都没有明显的差异。在热、冷、盐、干旱胁迫条件下,在野生型植株中检测了AtJ50基因的诱导表达。结果表明AtJ50基因表达受热激和盐胁迫诱导,干旱也能微弱增加AtJ50基因的表达量,而冷胁迫对AtJ50基因表达没有影响。检测了AtJ50突变体在热、冷、冻、盐、干旱胁迫条件下抗性的改变。结果显示突变体与野生型在对热、冷、冻、干旱胁迫的抗性方面没有明显区别;而在盐胁迫下AtJ50突变体的生活力明显弱于野生型,且突变体在盐胁迫时种子的生存率也明显低于野生型,说明AtJ50基因可能在植物抗盐性方面发挥功能。通过RT-PCR或PCR方法克隆了AtJ50基因的表达区序列及AtJ50基因的启动子序列,为进一步的组织、亚细胞定位及遗传转化做准备工作。