论文摘要
目的:研究纳米氧化铁双歧杆菌脂磷壁酸（Lipoteichoic Acid,LTA）和胞外多糖（Extracellular Polysaccharides,EPS）对人胃癌荷瘤鼠移植瘤生长的抑制作用,并探讨其抗肿瘤机制。方法:体外培养低分化腺癌BGC823人胃癌细胞株至对数生长期,左前肢腋下接种建立BALB/c裸鼠移植瘤模型。⑴纳米Fe3O4-LTA组,60只雄性BALB/c裸鼠,对荷瘤鼠随机分为6组:阴性对照组（生理盐水,NS）、阳性对照组（环磷酰胺,CY,25mg/只）、LTA作用组（100μg/kg）、纳米Fe3O4-LTA低剂量组（10μg/kg）、纳米Fe3O4-LTA中剂量组（50μg/kg）、纳米Fe3O4-LTA高剂量组（100μg/kg）。⑵纳米Fe3O4-EPS组,60只雄性BALB/c裸鼠,对荷瘤鼠随机分为6组:阴性对照组（生理盐水,NS）、阳性对照组（环磷酰胺,CY,25mg/只）、EPS作用组（0.5 mg /kg）、纳米Fe3O4-EPS低剂量组（0.1 mg /kg）、纳米Fe3O4-EPS中剂量组（0.25mg /kg）、纳米Fe3O4-EPS高剂量组（0.5 mg /kg）。CY组每5天给一次药,其它剂量组每两天给一次药。灌胃治疗14d。每3d以游标卡尺测量移植瘤的长短径、以电子天平称量荷瘤鼠体重,以给药时间为横坐标绘制移植瘤生长曲线、荷瘤鼠在治疗期间体重变化曲线。于接种后第21d处死实验动物,无菌提取荷瘤鼠腹腔巨噬细胞,用硝酸还原酶法检测各剂量组裸鼠腹腔巨噬细胞分泌NO和iNOS的含量;剥离荷瘤鼠瘤体计算抑瘤率,采用免疫组化法检测瘤体内血管生长因子VEGF、生存素Survivin和肿瘤相关巨噬细胞TAMs的蛋白含量表达。结果:1.纳米Fe3O4-LTA作用组:⑴纳米Fe3O4-LTA对人胃癌裸鼠移植瘤生长的抑制作用:服用纳米Fe3O4-LTA后,荷瘤裸鼠移植瘤的生长速度减慢,纳米Fe3O4-LTA各组、纯LTA组及CY组的瘤重显著低于NS组（P<0.05）,纳米Fe3O4-LTA低、中剂量组的抑瘤率分别为49%和42%,而纳米Fe3O4-LTA高剂量抑瘤率仅为34%,与纯LTA组的抑瘤率相仿。说明纳米Fe3O4-LTA具有一定的抗肿瘤效果,但给药剂量的多少与肿瘤抑制效果有密切关系。⑵人胃癌荷瘤鼠对纳米Fe3O4-LTA的适应性:通过与抗肿瘤化疗药物阳性对照组CY的治疗效果对比,从实验对象的体重方面来观察适应性,经口灌胃的纳米Fe3O4-LTA各剂量组裸鼠体重与阴性对照NS组相当,裸鼠体重稳步增长、对日常饮食量的需要无明显变化。而CY组虽然具有明显的抑制肿瘤的作用,但裸鼠的体重明显下降、消化系统出现紊乱,有恶性呕吐的现象,甚至有两只裸鼠死亡。说明荷瘤鼠对纳米Fe3O4-LTA的治疗无排斥,从一定程度上表示纳米Fe3O4-LTA无毒副作用。⑶荷瘤鼠腹腔巨噬细胞NO和iNOS水平表达:与阴性对照组相比,纳米Fe3O4-LTA刺激荷瘤鼠腹腔巨噬细胞分泌细胞因子NO和iNOS的含量显著升高（P<0.01）;除阳性对照组外,纳米Fe3O4-LTA低浓度组刺激巨噬细胞分泌NO和iNOS的含量均高于其它剂量组,且差异显著（P<0.05）。纳米Fe3O4-LTA各剂量组检测值都表示纳米Fe3O4-LTA浓度与荷瘤鼠腹腔巨噬细胞NO和iNOS的含量呈相关性。⑷荷瘤鼠实体瘤内VEGF、Survivin和TAMs免疫组化蛋白含量表达:纳米Fe3O4-LTA各剂量组胃癌移植瘤VEGF和TAMs的蛋白表达显著低于阴性对照组,差异具有极显著性（P<0.01）。与阴性对照组相比,纳米Fe3O4-LTA各剂量组胃癌移植瘤Survivin的蛋白表达显著降低（P<0.05）。且纳米Fe3O4-LTA低剂量组中,三种蛋白的表达与纯LTA剂量组相比,均具有显著性差异（P<0.05）。测定结果显示实体瘤内VEGF、Survivin和TAMs的蛋白含量与纳米Fe3O4-LTA的浓度具有一定的相关性。2.纳米Fe3O4-EPS作用组:⑴纳米Fe3O4-EPS对人胃癌裸鼠移植瘤生长的抑制作用:服用纳米Fe3O4-EPS后,荷瘤裸鼠移植瘤的生长速度减慢,纳米Fe3O4-EPS各组及CY组的瘤重显著低于NS组（P<0.05）,纳米Fe3O4-EPS高剂量组的抑瘤率为46%,且瘤体生长缓慢,表现出较好的抑瘤效果。纳米Fe3O4-EPS低剂量组的抑瘤率仅为21%,说明纳米Fe3O4-EPS具有一定的抗肿瘤效果,但给药剂量的多少与肿瘤抑制效果有密切关系。⑵人胃癌荷瘤鼠对纳米Fe3O4-EPS的适应性:通过与抗肿瘤化疗药物阳性对照组CY的治疗效果对比,从实验对象的体重方面来观察适应性,经口灌胃的纳米Fe3O4-EPS各剂量组裸鼠体重与阴性对照NS组相当,裸鼠体重稳步增长、对日常饮食量的需要无明显变化。而CY组虽然具有明显的抑制肿瘤的作用,但裸鼠的体重明显下降、消化系统出现紊乱,有恶性呕吐的现象。说明荷瘤鼠对纳米Fe3O4-EPS的治疗无排斥,从一定程度上表示纳米Fe3O4-EPS无毒副作用。⑶荷瘤鼠实体瘤内VEGF、Survivin和TAMs免疫组化蛋白含量表达:纳米Fe3O4-EPS各剂量组胃癌移植瘤VEGF和TAMs的蛋白表达显著低于阴性对照组,差异具有极显著性（P<0.01）。与阴性对照组相比,纳米Fe3O4-EPS各剂量组胃癌移植瘤Survivin的蛋白表达显著降低（P<0.05）。且纳米Fe3O4-EPS高剂量组中,三种蛋白的表达与纯EPS剂量组相比,均具有显著性差异（P<0.05）。测定结果显示实体瘤内VEGF、Survivin和TAMs的蛋白含量具有一定的相关性。结论:纳米F3O4-LTA和纳米F3O4-EPS对人胃癌裸鼠移植瘤的生长具有明显的抑制作用,且对治疗对象的副作用小。其抑瘤机制可能有以下几点:⑴激活巨噬细胞,使其分泌多种具有杀瘤作用的活性因子而抑制肿瘤细胞增殖;⑵下调肿瘤内VEGF、Survivin和TAMs蛋白的表达,降低了肿瘤内部血管的生长以及肿瘤迁移趋势,进而抑制其血管形成;⑶采用氧化铁作为纳米载体,增强了双歧杆菌LTA和EPS的渗透率,提高了治疗效果。