不同浓度庆大霉素对兔骨髓间充质干细胞体外软骨形成能力影响的研究

论文摘要

目的本文研究兔骨髓间充质干细胞(Bone marrow stem cells, BMSCs)在体外分离培养、诱导分化为成软骨的能力,并初步观察不同浓度(0μg/m、10μg/ml、50μg/ml100μg/ml200μg/ml)庆大霉素对其增殖、分化成软骨的影响。方法无菌条件下,从8周龄家兔取下一侧股骨及胫腓骨,通过全血培养法分离骨髓间充质干细胞,接种于含有胎牛血清的DMEM培养液中培养传代。每日以倒置显微镜观察细胞形态及生长情况。取第三代骨髓间充质干细胞分五组,包含一个对照组(培养液为兔骨髓间充质干细胞完全培养基：DMEM.10%胎牛血清、100U/m1青霉素、100μg/ml链霉素,不含庆大霉素)和四个含庆大霉素浓度组(分别是10μg/ml、50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml加兔骨髓间充质干细胞完全培养基)。采用MTT比色法进行增殖活性比较,Ⅱ型胶原免疫细胞化学染色和细胞甲苯胺蓝染色检测成软骨分化情况。结果1.体外培养的骨髓间充质干细胞呈扁平的梭形成纤维样细胞生长,且细胞形态均一,传代稳定。2.MTT实验显示庆大霉素在100μg/ml、200μg/ml抑制细胞增殖,其余各浓度组对细胞增殖无明显影响3.诱导后细胞甲苯胺蓝染色显示100μg/ml组及200μg/ml组细胞细胞染色较浅,大部分细胞失染,余各组阳性表达：Ⅱ型胶原免疫组织化学染色显示100μg/ml组及200μg/ml组细胞弱阳性表达,余各组阳性表达。结论1兔骨髓间充质干细胞取材简单方便,培养传代后增殖迅速,生长稳定。2兔骨髓间充质干细胞能向软骨细胞诱导分化。3庆大霉素在一定浓度(10μg/ml、50μg/ml)下对骨髓间充质干细胞的增殖和向软骨分化无明显影响,但高于一定浓度(100μg/ml,200μg/ml)则抑制骨髓间充质干细胞的增殖和软骨分化能力。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 縮略词
• 第一章 前言
• 第二章 对象与方法
• 2.1 实验动物
• 2.2 实验试剂
• 2.3 实验仪器及材料
• 2.4 试剂配制
• 2.5 实验方法
• 2.6 统计学方法
• 第三章 结果
• 3.1 兔原代BM-MSCs及传代BM-MSCs形态学观察
• 3.2 兔原代BM-MSCs的增殖活性检测
• 3.3 甲苯胺蓝染色
• 3.4 Ⅱ型胶原免疫组织化学染色
• 附图
• 第四章 讨论
• 4.1 兔BM-MSCs的提取与扩增
• 4.2 影响兔BM-MSCs培养的因素
• 4.3 MTT比色试验检测兔BM-MSCs增殖率
• 4.4 兔BM-MSCs体外诱导向软骨细胞分化
• 4.5 兔BM-MSCs的鉴定
• 4.6 不同浓度庆大霉素对兔BM-MSCs体外增殖、成软骨分化的影响
• 第五章 结论
• 参考文献
• 综述
• 参考文献
• 致谢
• 攻读硕士期间的主要研究成果