鸡腿菇发酵液降血糖活性研究

论文摘要

目前,糖尿病已成为全世界许多国家的常见病和多发病,其死亡率已居肿瘤、心血管之后的第三位,根据WHO预测,1995-2025年间,中国糖尿病增长幅度将达68%,增长率居全球首位,届时我国糖尿病患者绝对人数将突破5000万。如此多的糖尿病患者,而且糖尿病为临床慢性病,必须终生服药,因此寻找新的保健食品或药物用于控制血糖和治疗糖尿病显得刻不容缓。从大型药用真菌中开发降血糖药具有药源广泛,降糖作用温和、疗效确切和毒副作用小等优点。因此,在药用真菌领域寻找天然降血糖药物或食物是目前防治糖尿病研究的重要课题。本课题从9种药用真菌中通过抑制体外非酶糖基化反应和对高血糖小鼠降血糖作用筛选出降血糖活性最好的菌种,对其发酵培养基进行了优化,通过动物试验对其降血糖活性与服用安全性进行了较为深入的研究,并从其发酵液中分离纯化出一种具有降血糖活性的物质。1.以体外对非酶糖基化反应的抑制率为指标比较了9种药用真菌发酵液体外降血糖活性,筛选出三种抑制率相对较高的药用真菌,鸡腿菇、金耳、猴头在体外对非酶糖基化反应的抑制率依次为76.40%、56.11%、55.29%。同时鸡腿菇发酵液对四氧嘧啶高血糖小鼠血糖调节的效果最明显。所以我们选择鸡腿菇这种药用真菌做进一步降血糖研究。2.以单因素试验所筛选的适宜碳源、氮源和复合营养因子以及多种无机盐为试验因素,以对应发酵液对非酶糖基化反应的抑制率为指标,采用四因素三水平L9（34）正交试验,获得鸡腿菇液体发酵优化培养基组成为:麦芽糖4%,牛肉膏0.6%,黄豆芽2%,洋葱1%,MgSO40.12%,FeSO40.1%,CuSO40.03%,ZnSO40.05%。使用此培养基液体培养鸡腿菇菌丝体,其发酵液对非酶糖基化反应的抑制率高达97.32%,同时通过动力学试验确定了鸡腿菇培养7天是其发酵液对非酶糖基化的抑制率最高。3.鸡腿菇发酵液可以降低2型糖尿病小鼠血清中血糖、三磷酸甘油酯、丙二酮和脏器中NO含量,降低肾脏中乳酸脱氢酶活性,同时提高脏器中超氧化物岐化酶、谷胱甘肽还原酶、骨骼肌中己糖激酶、丙酮酸激酶、苹果酸脱氢酶、琥珀酸脱氢酶活性,加速葡萄糖分解,促进三羧酸循环正常进行的功效,但鸡腿菇发酵液对总胆固醇含量无显著影响。4.通过对正常小鼠饲喂含不同剂量鸡腿菇发酵液的基础饲料,测定与肝肾正常生理功能密切相关的各项生化指标,初步考察了鸡腿菇发酵液的服用安全性。结果表明,鸡腿菇发酵液所选低、中剂量不会造成小鼠脏器和功能的损伤,但是高剂量组可能会造成肝脏功能的一定损伤,提示服用低、中剂量鸡腿菇发酵液是安全的。5.以非酶糖基化反应抑制率为主要检测指标,通过AB-8大孔树脂吸附分离,达到对鸡腿菇发酵液中抑制非酶糖基化反应有效成份的追踪。然后利用M-Bondapak-C18常压液相色谱进一步分离、纯化得到一种伯酰胺类化合物,该化合物对非酶糖基化反应的抑制率为26.4%,说明其具有一定的降血糖活性。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一章 绪论
• 1.1 药用真菌的研究现状
• 1.1.1 药用真菌的药理研究
• 1.1.2 药用真菌的化学成分
• 1.1.3 药用真菌有效成分的分离及其结构
• 1.1.4 药用真菌治疗糖尿病
• 1.2 鸡腿菇
• 1.2.1 鸡腿菇的生物学特性
• 1.2.2 鸡腿菇的营养成分
• 1.2.3 鸡腿菇的药用价值
• 1.3 立题意义
• 1.4 主要研究内容
• 第二章 降血糖药用真菌菌种筛选
• 2.1 材料与方法
• 2.1.1 材料
• 2.1.2 试验方法
• 2.1.3 数据分析
• 2.1.4 统计学处理
• 2.2 结果与分析
• 2.3 本章小结
• 第三章 鸡腿菇液体发酵培养基优化
• 3.1 材料与方法
• 3.1.1 材料
• 3.1.2 方法
• 3.2 结果与分析
• 3.2.1 单因子试验
• 3.2.2 正交试验结果
• 3.2.3 抑制率动力学曲线
• 3.2.4 培养基优化前后发酵液抑制率比较
• 3.3 本章小结
• 第四章 鸡腿菇液体培养液对糖尿病鼠血糖调节作用
• 4.1 试验材料
• 4.1.1 实验动物
• 4.1.2 试剂与材料
• 4.1.3 仪器与设备
• 4.2 试验方法
• 4.2.1 鸡腿菇发酵液的制备
• 4.2.2 理化指标的测定
• 4.3 结果与讨论
• 4.3.1 鸡腿菇发酵液对血糖的影响
• 4.3.2 鸡腿菇发酵液对血清中脂代谢的影响
• 4.3.3 鸡腿菇发酵液对氧化应激反应的影响
• 4.3.4 鸡腿菇发酵液对肾脏中乳酸脱氢酶（LDH）的影响
• 4.3.5 发酵液对骨骼肌中几种与糖代谢有关酶的影响
• 4.3.6 对小鼠体重的影响
• 4.4 本章小结
• 第五章 鸡腿菇液体培养液安全性试验
• 5.1 材料与方法
• 5.1.1 试验动物
• 5.1.2 材料和仪器
• 5.1.3 发酵液的预处理
• 5.1.4 给药组饲料的制备
• 5.1.5 动物分组及处理方法
• 5.1.6 理化指标的测定
• 5.1.7 小鼠体重的测定
• 5.1.8 数据处理方法
• 5.2 结果与讨论
• 5.2.1 发酵液对血清中血肌酐（Cr）的影响
• 5.2.2 发酵液对血清总胆红素（TB）的影响
• 5.2.3 发酵液对碱性磷酸酶（AKP）的影响
• 5.2.4 发酵液对谷丙转氨酶（ALT/GTP）的影响
• 5.2.5 发酵液对谷草转氨酶（AST/GOT）的影响
• 5.2.6 发酵液对小鼠体重的影响
• 5.3 本章小结
• 第六章 鸡腿菇发酵液降血糖活性物质分离纯化
• 6.1 材料与方法
• 6.1.1 材料
• 6.1.2 鸡腿菇发酵液及其预处理
• 6.1.3 AB-8大孔树脂分离纯化鸡腿菇发酵液中抑制非酶糖基化反应有效成份的追踪
• 6.1.4 M-Bondapak-C18常压液相色谱分离纯化
• 6.1.5 纯化样品紫外吸收全波段扫描
• 6.1.6 纯化样品HPLC纯度检测
• 6.1.7 红外光谱测定方法
• 6.1.8 纯化样品对非酶糖基化反应的抑制
• 6.2 结果与讨论
• 6.2.1 大孔树脂洗脱液抑制非酶糖基化反应
• 6.2.2 M-Bondapak-C18常压液相色谱结果分析
• 6.2.3 纯化样品紫外吸收全波段扫描结果
• 6.2.4 纯化样品HPLC纯度检测结果
• 6.2.5 纯化样品红外光谱分析结果
• 6.2.6 纯化样品对非酶糖基化反应的抑制结果
• 6.3 本章小结
• 第七章 工作总结与展望
• 7.1 主要研究结论
• 7.2 工作展望
• 参考文献
• 致谢
• 攻读硕士学位期间发表的文章