论文摘要
目的以线栓法制备SD大鼠脑缺血再灌注模型,研究莫诺苷（morroniside）对此模型大鼠神经细胞凋亡的保护作用及其作用机制,为缺血性脑血管疾病的治疗提供一种新的脑保护药物。方法采用改良Zea Longa线栓法制备SD大鼠脑缺血再灌注模型,栓塞30min后再灌注,术后随机分为假手术组,模型组,莫诺苷小（30mg/kg）、中（90mg/kg）、大（ 270mg/kg）剂量组和阳性药（维生素E）组。连续灌胃给药7d,每天1次,其中假手术组和模型组给予等量的生理盐水。7d后取脑,采用原位末端转移酶标记技术（TUNEL）测定各组大鼠大脑缺血半影区的神经细胞凋亡情况;应用分光光度法检测大鼠脑组织患侧海马中活性促凋亡酶Cleaved caspase-3和Cleaved caspase-9的酶活变化;用western blot方法检测各组大鼠患侧皮层Bcl-2、Bax、Cyt-c的表达以及Bcl-2/Bax比率的变化情况;用免疫组织化学方法测定患侧脑组织缺血半影区Cleaved caspase-3、Bax和Cyt-c的表达。结果1、脑缺血再灌注模型组大鼠脑组织中凋亡的神经细胞显著增加,莫诺苷连续灌胃给药7天后各剂量组神经细胞的凋亡明显减少,并呈现一定的量效关系（P<0.05）。2、脑缺血再灌注模型组大鼠脑组织中Bcl-2家族的Bcl-2和Bax的表达失去平衡,促凋亡基因Bax表达增强,抑制凋亡基因Bcl-2表达减弱。莫诺苷能显著降低Bax表达水平,增加Bcl-2的表达,使Bcl-2/Bax比率上升（P<0.05）。3、莫诺苷能够显著减少大鼠脑缺血再灌注后大脑皮层及缺血半影区Cyt-c的水平,并呈现一定的量效关系（P<0.05）。4、脑缺血再灌注模型组大鼠脑组织凋亡启动及执行酶Caspase-9和Caspase-3的酶活性显著增强,莫诺苷能显著降低缺血损伤后的Caspase酶活性,并呈现一定的量效关系（P<0.05）。结论莫诺苷能够抑制缺血半影区神经细胞的凋亡发生,从而对脑缺血再灌注损伤起到抑制神经细胞凋亡的作用。莫诺苷发挥抑制凋亡作用的主要机制可能为:使促凋亡基因与抑制凋亡基因的表达趋于平衡;抑制Cyt-c的表达及其由线粒体的外溢;降低启动、执行凋亡的酶的活性。
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