论文摘要
背景急性心肌梗死（acute myocardial infarction, AMI）属于冠心病的一种严重类型,其发病率呈逐年增加趋势。急性心肌梗死可导致各种心律失常的发生,严重影响患者的预后和生活质量。近年来研究表明心肌梗死后心律失常的发生与维持和心脏中缝隙连接蛋白（connexin,Cx）的重构有关。在心脏组织中表达的连接蛋白有Cx30.2、Cx43和Cx45等,Cx30.2和Cx45发挥房室传导延迟的作用,进而保证心房、心室的同步有序收缩,目前尚未见到在动物模型中二者表达变化的研究。Cx43是心室肌表达的主要连接蛋白,Cx45在心室肌有一定的表达,心肌梗死后二者的变化趋势尚有争议。研究证实,β受体阻滞剂（美托洛尔）使连接蛋白的表达及分布发生改变,由此可以减少心肌梗死后心律失常的发生。阿尔马尔作为α、β双重受体阻滞剂,有降压和抗心律失常的作用,目前国内外对α、β双重受体阻滞剂类药物影响急性心肌梗死后Cx30.2、Cx43及Cx45表达和分布的相关研究鲜见报道。目的本实验拟通过建立急性心肌梗死大鼠模型,应用免疫组化和逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）检测结区组织中Cx30.2、Cx45和左心室肌中Cx43、Cx45的表达,及阿尔马尔对Cx30.2、Cx43和Cx45表达的影响；为阿尔马尔防治急性心肌梗死时心律失常的发生提供重要的理论依据。材料与方法1实验动物与分组选取健康成年雄性SD大鼠40只,8周龄,体重200g-250g,将40只大鼠随机分为四组：急性心肌梗死模型组（MI组,n=10）、阿尔马尔治疗组（A组,n=10）、假手术组（SH组,n=10）和正常对照组（N组,n=10）。2实验方法与检测指标（1）SD大鼠称重后用10%水合氯醛溶液腹腔注射麻醉,在呼吸机辅助下行左冠状动脉结扎,制作大鼠急性心肌梗死模型；阿尔马尔治疗组给予阿尔马尔溶液（0.91mg/kg）,2次/d,灌胃治疗4w,其余3组给予等量生理盐水。（2）HE染色后在olympus光学显微镜下观察心肌细胞形态结构变化。（3）免疫组化法检测结区组织中Cx30.2蛋白和Cx45蛋白的分布及急性心肌梗死区、边缘区及非缺血区Cx43蛋白和Cx45蛋白的分布。利用图象分析系统在光镜下对各组免疫组化染色切片进行分析,测定每个视野下阳性物质的平均光密度,测量数据由计算机自动统计得出。（4）逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）检测结区组织中Cx30.2mRNA和Cx45mRNA的表达及急性心肌梗死区、边缘区及非缺血区Cx43mRNA和Cx45mRNA的表达,用quantity one软件分析。3统计学方法计量数据用均数±标准差（x±s）表示,运用SPSS17.0统计学软件包进行处理,各组均数间比较采用单因素方差分析的检验方法,任意两组间比较用LSD。检验水准均取α=0.05。结果1、心肌组织形态学的变化：与正常组相比,假手术组心肌细胞无明显变化；模型组梗死边缘区和中心区心肌细胞大面积坏死并由增生的胶原纤维组织替代；正常区心肌细胞代偿性肥大,排列紊乱,间质可见明显胶原增生,有炎性细胞浸润；阿尔马尔治疗组心肌细胞体积、心肌纤维增生程度较模型组减轻,心肌纤维排列较整齐,间质胶原增生及炎性细胞浸润较模型组减轻。2、结区组织中Cx30.2和Cx45的表达：Cx30.2和Cx45蛋白的平均光密度值及mRNA灰度值的变化趋势是一致的：与正常组相比,假手术组无明显变化,差异无统计学意义（P>0.05）；模型组明显增加,差异有统计学意义（P<0.05）,提示心肌梗死后Cx30.2和Cx45的表达受到不同程度的影响。3、左心室肌组织中Cx43和Cx45的表达：Cx43和Cx45蛋白的平均光密度值及mRNA灰度值的变化趋势为：与正常组相比,假手术组和梗死组正常区Cx43、Cx45蛋白及mRNA表达无明显变化,差异无统计学意义（P>0.05）；模型组梗死边缘区和模型组梗死中心区Cx43蛋白及mRNA表达均显著降低,差异有统计学意义（P<0.05）,而Cx45蛋白及mRNA表达明显增加,差异有统计学意义（P<0.05）,提示心肌梗死后Cx43和Cx45的表达受到不同的影响。4、阿尔马尔对Cx30.2、Cx43和Cx45的影响：给予阿尔马尔治疗4w后结区组织中Cx30.2和Cx45表达较模型组显著降低,差异有统计学意义（P<0.05）,提示阿尔马尔可以在一定程度上改变Cx30.2和Cx45的表达；左心室肌中Cx43,在阿尔马尔治疗组梗死边缘区和梗死中心区的表达,较其在模型组相应部位的表达呈显著增加的趋势,差异有统计学意义（P<0.05）,Cx45显著降低,差异有统计学意义（P<0.05）。提示阿尔马尔可以影响Cx43和Cx45的表达。结论1、急性心肌梗死后结区组织中Cx30.2和Cx45蛋白表达增加,分布紊乱；二者mRNA表达亦增加；2、急性心肌梗死后左心室肌组织中Cx43蛋白大量降解、分布紊乱；Cx45蛋白表达增加,分布亦紊乱；Cx43mRNA表达减少,而Cx45mRNA表达增加；3、阿尔马尔可减少结区组织中Cx30.2和Cx45的表达,增加左心室肌组织中Cx43的表达并抑制Cx45的表达,其机制与其减轻心肌组织缺血坏死、保护心肌有关。
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相关论文文献
- [1].Cx30.2和Cx45在急性心肌梗死大鼠心脏结区组织中的表达[J]. 中国医药导报 2015(06)
标签：阿尔马尔论文; 心肌梗死论文; 连接蛋白论文; 免疫组化论文; 逆转录聚合酶链式反应论文;