论文摘要
目的：1、探讨卷烟烟气抽提物（CSC）对人支气管上皮细胞（BEAS-2B）氧化损伤作用及其机理；2、观察茶多酚（TPs）对CSC致BEAS-2B细胞氧化损伤的保护作用,探讨TPs的保护机理,为卷烟烟气损伤的医学防护提供实验依据。方法：通过用JJ-100型单通道吸烟机将卷烟烟气吸收于无水乙醇和LHC-8培养液中,混合后制成抽提物进行实验；实验分为8组：空白组、CSC低、中、高浓度染毒组、TPs对照组、TPs保护低、中、高CSC浓度染毒组；空白组将BEAS-2B细胞培养液在37℃下孵育2小时；TPs对照组在BEAS-2B细胞培养液中加入250mg、L的TPs,37℃下孵育2小时；3个CSC低、中、高浓度染毒组分别将CSC按设计浓度加入BEAS一2B细胞培养液中37℃下孵育2小时；TPs保护低、中、高浓度染毒组,先分别加入250 mg/L TPs置于BEAS-2B细胞培养液中37-C下孵育2小时,然后加入CSC染毒继续孵育2小时。采用彗星实验和Y-H-AX表达情况检测细胞DNA损伤,HPRT基因突变检测基因点突变,微核实验检测染色体损伤,利用体视学检测细胞恶性化来研究CSC对细胞的遗传毒性作用及TPs的保护作用；通过分光光度法及荧光光度法测量细胞内外超氧阴离子、过氧化氢、羟自由基的浓度,采用化学发光法检测SOD活性的改变及细胞内酶LDH的逸出检测细胞膜损伤。结果：1、彗星实验表明：CSC导致BEAS-2B细胞DNA双链断裂,造成细胞拖尾率增加,彗星尾长增加,与空白组相比差异有统计学意义（P＜0.05）,TPs与同剂量的CSC组相比DNA损伤减轻（P＜0.05）；2、WESTBLOT实验表明：CSC导致细胞Y-H2AX蛋白表达增加,造成了DNA损伤,TPs与同剂量的CSC组相比能减轻DNA损伤；3、微核实验表明：CSC可引起BEAS-2B细胞中的微核率增高,高剂量组微核率高达79.6‰,与空白组相比差异有统计学意义（P<O.05）,TPs与同剂量的CSC组相比微核率降低（P＜0.05）；4、HPRT基因突变率检测表明：CSC可引起HPRT基因突变率增高,最高可以达到1.058%0,与空白组相比差异有统计学意义（P＜0.05）,TPs与同剂量的CSC组相比基因突变率降低（P<0.05）；5、体视学分析表明：CSC可引起细胞的胞体及胞核面积、最小直径、等效直径和形状因子发生改变,相对空白组细胞形态趋向恶性化（P<0.05）,TPs对CSC引起的细胞形态恶性化改变有明显的抑制作用（P<0.05）；6、细胞ROS检测表明：CSC可导致细胞外的超氧阴离子、过氧化氢、羟自由基,细胞内的超氧阴离子、过氧化氢均增高,有剂量—效应关系,与空白组相比差异有统计学意义（P<0.05）,TPs与同剂量的CSC组相比ROS浓度降低（P<0.05）；7、SOD和LDH活性检测表明：CSC可导致细胞SOD活性降低,造成细胞膜受损,通透性增加,使细胞内LDH大量溢出,与空白组相比差异有统计学意义（P<0.05）,TPs与同剂量的CSC组相比损伤降低（P<0.05）。结论：1、CSC通过诱发BEAS-2B细胞产生活性氧,造成细胞膜氧化性损伤,导致细胞膜通透性增加,遗传物质受损；2、250mg/LTPs可减轻CSC的氧化损伤而达到保护作用。