降胆固醇乳酸菌的研究

论文摘要

本研究主要从中国传统发酵制品为实验原料，从中筛选降胆固醇的益生乳酸菌，并对具有降胆固醇能力较高的乳酸菌进行定向诱导、模拟胃肠环境试验；并对试验菌株进行菌种鉴定和生物特性的研究，及动物体内降血清胆固醇试验；研究了中草药对降胆固醇乳酸菌生长的影响，添加最佳促生长中草药成分，进行降胆固醇发酵乳优化试验。以改良KENJI培养基为选择性培养基进行乳酸菌筛选，初步获得降胆固醇的益生乳酸菌共51株，采用磷硫铁法测定乳酸菌的胆固醇降解能力，选取降胆固醇能力较强的13株乳酸菌，在KENJI发酵培养基中进行了降胆固醇的定向诱导试验，菌株的降胆固醇能力提高2.3%～9.8%，从中筛选出降胆固醇能力提高较大的菌株YS-09、GL-02、ZP-04、ZP-05、GL-03、GL-AA、ZP-W、YS-11、ZP-Z进行模拟胃肠环境试验，筛选出具有较好的耐酸、耐胆盐及对小肠上皮细胞粘附性、抑菌特性的乳酸菌。根据形态特征、生理生化及多糖发酵试验进行菌株鉴定，菌株ZP-Z、ZP-05、ZP-W菌为植物乳杆菌，菌株GL-03为干酪乳杆菌干酪亚种，菌株YS-09、YS-11为嗜酸乳杆菌，菌株ZP-04为短乳杆菌，菌株GL-AA和GL-02为鼠乳杆菌。对降胆固醇效果最好的GL-03菌株进行生物学特征研究，其最适温度为37℃,最最低生长温度约13℃左右，最高生长温度约为46℃左右；其最适起始pH6最低起始生长pH为3.6，最高起pH约为9.6；从其生长曲线上可以看出在MRS液体培养基中，GL-03在4h左右进入对数生长期，20h左右进入稳定期。并对GL-03进行了饲喂小白鼠体内降低血清胆固醇的动物实验，灌胃组的血清TC和TG含量比高脂组显著降低，结果表明其能降低小鼠血清胆固醇血清胆固醇功效。在GL-03菌株应用方面，作了降胆固醇中草药对其生长的影响和含中草药发酵乳的发酵条件的研究，从16种具有降胆固醇作用的中草药中，筛选出山楂为最佳生长促进因子，通过正交实验和感官指标综合评价选出功能性含中草药的酸奶的最佳配方和发酵条件为：蔗糖浓度6%，发酵温度41℃，山楂浓度1%，GL-03、保加利亚杆菌和嗜热链球菌3种菌混合的作为发酵菌种（1:0.5:0.5）。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 绪论
• 1.1 益生菌的研究概况
• 1.1.1 益生菌的定义
• 1.1.2 益生菌的种类
• 1.1.3 益生菌应具备的条件
• 1.1.3.1 对酸和胆盐有一定抗性
• 1.1.3.2 能在肠道中黏附定植
• 1.1.3.3 不携带可转移的耐药因子
• 1.1.3.4 对宿主的安全性
• 1.1.4 益生性乳酸菌的生理功能
• 1.2 降胆固醇乳酸菌的研究概述
• 1.2.1 降胆固醇乳酸菌的发现和发展
• 1.2.2 乳酸菌降胆固醇的研究现状及机理
• 1.2.3 影响降胆固醇能力的因素
• 1.2.4 筛选降胆固醇益生菌应注意的问题
• 1.2.5 降胆固醇乳酸菌研究存在的问题
• 1.2.6 降胆固醇乳酸菌研究的热点与进展
• 1.3 主要研究意义和研究内容
• 1.3.1 主要研究意义
• 1.3.2 主要研究内容
• 第二章 降胆固醇乳酸菌的筛选
• 2.1 材料和方法
• 2.1.1 材料和主要试剂
• 2.1.2 主要仪器
• 2.2 方法
• 2.2.1 降胆固醇乳酸菌的分离及初步鉴定
• 2.2.1.1 乳酸菌富集培养
• 2.2.1.2 乳酸菌的分离和纯化
• 2.2.1.3 过氧化氢酶测定
• 2.2.1.4 乳酸的检测
• 2.2.2 胆固醇降解能力的测定
• 2.3 结果与分析
• 2.3.1 降胆固醇乳酸菌的分离及初步鉴定结果
• 3.3.2 胆固醇降解能力的测定
• 第三章 降胆固醇乳酸菌的定向诱导和模拟胃肠环境试验
• 3.1 实验材料和方法
• 3.1.1 试验材料
• 3.1.1.1 菌株及主要试剂
• 3.1.1.2 主要仪器
• 3.1.2 试验方法
• 3.1.2.1 定向诱导的方法
• 3.1.2.2 模拟胃肠环境试验
• 3.2 结果与分析
• 3.2.1 降胆固醇乳酸菌的定向诱导试验结果
• 3.2.2 模拟胃肠环境试验结果
• 3.2.2.1 耐酸试验结果
• 3.2.2.2 耐胆盐试验结果
• 3.2.2.3 粘附性试验结果
• 3.2.2.4 抑菌试验结果
• 3.2.2.5 药敏试验
• 第四章 菌株鉴定和生物特性研究
• 4.1 试验材料和试验方法
• 4.1.1 实验材料
• 4.1.1.1 菌株与培养基
• 4.1.1.2 主要仪器
• 4.1.2 试验方法
• 4.1.2.1 常规的生理生化鉴定
• 4.1.2.2 糖类发酵特性试验
• 4.1.2.3 最高、最低、最适生长温度和 pH 值的测定
• 4.1.2.4 生长曲线的测定
• 4.2 试验结果与讨论
• 4.2.1 常规的理化鉴定结果
• 4.2.2 乳杆菌属内种的鉴定结果
• 4.2.3 最适生长温度
• 4.2.4 最高及最低生长温度
• 4.2.5 最适起始生长 PH
• 4.2.6 最高及最低起始生长 PH
• 4.2.7 生长曲线测定
• 第五章 菌株的体内降胆固醇活性的研究
• 5.1 材料和方法
• 5.1.1 实验材料
• 5.1.2 试验方法
• 5.1.2.1 灌胃菌液的制备
• 5.1.2.2 高脂饲料的制备
• 5.1.2.3 实验动物分组及饲养方式
• 5.1.2.4 血样的采集与检测
• 5.2 结果与分析
• 5.2.1 灌胃乳酸菌 GL-03 菌液对小鼠血脂的影响
• 5.2.2 灌胃乳酸菌 GL-03 菌液对小鼠体重与脏体比的影响
• 第六章 含降胆固醇中草药酸乳的发酵条件的研究
• 6.1 材料和方法
• 6.1.1 实验材料
• 6.1.2 主要仪器
• 6.1.3 试验方法
• 6.1.3.1 中草药提取液的制备
• 6.1.3.2 不同中草药提取液的不同浓度与乳酸菌的协同试验
• 6.1.3.3 含中草药酸乳的发酵条件的研究
• 6.2 结果与分析
• 6.2.1 不同中草药提取液的不同浓度与乳酸菌的协同试验结果
• 6.2.2 正交试验结果
• 6.2.3 感官指标评价
• 第七章 结果与展望
• 参考文献
• 致谢
• 附录 A 降胆固醇乳酸菌的初步鉴定结果
• 附录 B 不同乳酸菌的耐酸能力
• 附录 C 不同乳酸菌的耐胆盐能力
• 附录 D 试验菌株对选择的碳氢化合物的细胞表面疏水特性
• 附录 E 乳酸菌对不同抗菌药物药敏性
• 附录 F 乳酸菌的常规的理化鉴定结果
• 附录 G 科研项目及发表文章