舟山沿海潮间带产抑菌活性物质微生物的筛选和CZⅣ-1068菌株的初步研究

论文摘要

陆地微生物资源曾是抗生素的主要来源。但随着陆生生物资源的不断开发,发现新的抗生素的几率越来越低。海洋独特的环境,使海洋微生物具有生物物种多样性、基因多样性、代谢机制的多样性和代谢产物的多样性,已成为世界各国开发新型药物的热点领域。采用多种培养基对舟山沿海潮间带底泥微生物进行分离,并对分离的菌株采用纸片扩散法进行拮抗实验。结果表明马铃薯蔗糖琼脂培养基分离真菌、蛋白胨琼脂培养基分离放线菌、MR2A培养基分离细菌的效果较好,从7个采样点分离到的484株菌株中,82株为放线菌,331株为真菌,71株为细菌;其中154株菌株（31.8%）具有抗菌活性,有部分菌株有较广的抗菌谱和强抗菌活性,拮抗菌株主要以抗革兰氏阳性菌为主（74.6%）,抗革兰氏阴性菌（40.3%）和抗真菌（35.4%）的比例较低。CZⅣ-1068是从舟山长峙岛潮间带海泥中分离到的一株弱嗜盐菌,最适盐度范围为1-3.5%,经琼脂扩散法抗菌模型筛选表明对大肠杆菌、副溶血性弧菌、枯草芽孢杆菌,金黄色葡萄球菌,藤黄微球菌、白假丝酵母有拮抗作用。利用形态学观察、生理生化反应对菌株进行了初步研究,并利用PCR的方法扩增了CZⅣ-1068的16S rDNA,然后进行核昔酸序列测定分析,结果表明CZⅣ-1068与Bacillus sp.82344（AF227848）相似性高达100%,初步确定为腊状芽孢杆菌（Bacilluscereus）的一种。对CZⅣ-1068菌株的发酵条件进行了研究,结果显示其最适摇瓶发酵条件是:菌龄48h、接种量6%、摇瓶装量40ml/250ml三角烧瓶、发酵温度25℃、初始pH为8、培养时间为30h。同时发现菌株CZⅣ-1068在不同的培养条件下所产生的主要抑菌物质也有所不同,因此需要根据代谢物的不同来选择合适的培养条件。

论文目录

• 中文摘要
• ABSTRACT
• 第一章 文献综述
• 1.1 海洋微生物的种类和分布
• 1.1.1 海洋细菌
• 1.1.2 海洋放线菌
• 1.1.3 海洋真菌
• 1.1.4 海洋古菌
• 1.2 海洋微生物活性物质的研究概况
• 1.2.1 抗生素
• 1.2.2 抗肿瘤活性物质
• 1.2.3 毒素
• 1.2.4 酶制剂
• 1.3 分子生物学技术在海洋微生物多样性研究中的应用
• 1.3.1 应用序列分析方法评价海洋微生物多样性
• 1.3.2 核酸杂交分析技术来鉴定和分析海洋微生物
• 1.3.3 基于 PCR技术进行的海洋微生物群落结构分析
• 1.4 本课题的研究内容、目的和意义
• 参考文献
• 第二章 具有抑菌活性的潮间带海洋微生物筛选
• 2.1 前言
• 2.2 材料和方法
• 2.2.1 样品来源
• 2.2.2 菌种分离
• 2.2.3 微生物平板菌落计数
• 2.2.4 菌株纯化
• 2.2.5 菌株初步鉴定
• 2.2.6 菌种保存
• 2.2.7 抑菌活性检测
• 2.3 结果
• 2.3.1 不同培养基的分离效果比较
• 2.3.2 微生物抗菌活性的测定
• 2.4 讨论
• 2.4.1 不同培养基对海泥微生物的分离效果
• 2.4.2 不同环境潮间带海泥微生物的分布
• 2.4.3 抗菌活性分析
• 参考文献
• 第三章 具有抗菌活性的菌株 CZIV-1068的鉴定
• 3.1 前言
• 3.2 材料和方法
• 3.2.1 实验材料
• 3.2.2 实验试剂
• 3.2.3 实验仪器
• 3.2.4 实验方法
• 3.3 实验结果
• 3.3.1 菌株基本形态学特征
• 3.3.2 菌株生理生化反应特征
• 3.3.3 菌株16S rDNA鉴定
• 3.4 讨论
• 参考文献
• 第四章 菌株 CZIV-1068的发酵条件摸索
• 4.1 前言
• 4.2 材料和方法
• 4.2.1 菌株来源
• 4.2.2 试剂和药品
• 4.2.3 实验指示菌
• 4.2.4 实验仪器
• 4.2.5 实验方法
• 4.3 结果
• 4.3.1 不同 NaCl浓度对菌株生长及产生活性物质的影响
• 4.3.2 不同温度对菌株生长及产生抑菌活性物质的影响
• 4.3.3 不同初始pH值对菌株生长及产生抑菌活性物质的影响
• 4.3.4 不同供氧量对菌株生长及产生抑菌活性物质的影响
• 4.3.5 不同接种量对菌株生长及产生抑菌活性物质的影响
• 4.3.6 发酵过程中的动态测定
• 4.4 讨论
• 4.5 结论
• 参考文献
• 第五章 结论与展望
• 致谢
• 攻读学位期间发表的学术论文目录