FGF-20在肝癌中表达的生物学意义及其调控途径初步分析

论文摘要

研究背景与目的 成纤维细胞生长因子（fibroblast growth factor,FGF）家族成员存在于从线虫到人类的所有生物体内,分子量从17KDa到34KDa不等,之间保持有13%～72%的氨基酸序列同源性。到目前为止已发现至少23个成员,依次命名为FGF-1～FGF-23（其中FGF-15尚未在人类染色体中定位）。庞大的FGF家族成员作为细胞间的多能信号分子调节着生物体多种正常生理功能,并且已对多种细胞显示出多样生理和/或药理作用。 FGF-20是一个新克隆的成纤维细胞生长因子家族成员,它由3个外显子和2个内含子组成,定位于人类染色体8p21.3-p22区域。这是第一个定位于8号染色体的FGF家族成员。人类FGF-20基因编码一个由211个氨基酸组成的多肽,其中包括FGF家族的核心序列（含有一个疏水结构域）。通过对公共数据库的搜索发现,对应于FGF-20基因的EST（expressed sequence tag）仅有4种,全部都存在于该基因的第一个外显子中。如此少的ESTs对应于FGF-20基因,提示该基因可能很少被转录。随后的研究也证实了这一点,即在人体正常组织中,FGF-20仅在脑组织,特别是小脑组织有表达,而在其他组织中则不表达或表达量很低。作为FGF家族的成员之一,FGF-20同样在形态发生、组织修复、神经营养、血管生成和肿瘤发生等过程中发挥着重要作用。 目前仅有2篇关于FGF-20与肿瘤关系的研究报告。研究显示,人体正常肝组织和胎肝组织均不表达FGF-20 mRNA;而在人类肝癌细胞株中,仅检测了HepG2,也未发现FGF-20 mRNA表达。肝癌是我国的特色癌。这样一个严重威胁我国人民健康的恶性肿瘤与FGF-20的关系如何?FGF-20能否作为肝癌乃至其他肿瘤诊断和治疗的靶分子?FGF家族中很多成员（如aFGF和bFGF）都和肿瘤血管生成有关,

论文目录

• 英文缩略词表
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• 前言
• 第一部分 重组人FGF-20蛋白的原核表达和抗血清制备摘要
• 1 实验材料
• 1.1 主要化学药品、生物试剂
• 1.2 载体、菌株和细胞株
• 1.3 动物
• 1.4 主要溶液的配制
• 1.5 主要实验仪器
• 2 实验方法
• 2.1 人类FGF-20 cDNA的克隆
• 2.2 rhFGF-20原核表达系统的构建
• 2.3 rhFGF-20蛋白原核表达条件的优化
• 2.4 rhFGF-20蛋白的表达与纯化
• 2.4.1 重组大肠杆菌（DE3）的大量培养
• 2.4.2 细菌裂解
• 2.4.3 包涵体提取
• 2.4.4 包涵体溶解
• 2+-琼脂糖层析纯化rhFGF-20蛋白'>2.4.5 NTA-Ni²⁺-琼脂糖层析纯化rhFGF-20蛋白
• 2.5 rhFGF-20蛋白的复性和活性测定
• 2.6 rhFGF-20抗血清的制备和鉴定
• 2.6.1 动物选择
• 2.6.2 准备工作
• 2.6.3 免疫方案
• 2.6.4 抗血清鉴定
• 2.7 统计学分析
• 3 实验结果
• 3.1 FGF-20 cDNA克隆的鉴定
• 3.1.1 RT-PCR产物的电泳分析
• 3.1.2 pET-24a-FGF-20的酶切分析
• 3.1.3 pET-24a-FGF-20的测序分析
• 3.2 大肠杆菌表达rhFGF-20蛋白的最佳条件
• 3.3 rhFGF-20蛋白的纯度分析
• 3.4 rhFGF-20蛋白的促细胞增殖活性
• 3.5 兔抗rhFGF-20蛋白抗血清的效价和特异性
• 4 讨论
• 5 小结
• 第二部分 肝癌高表达FGF-20的生物学意义以及与β-catenin的相关性分析摘要
• 1 实验材料
• 1.1 主要化学药品、生物制剂
• 1.2 肝癌和癌旁组织标本
• 2 实验方法
• 2.1 组织芯片的制作
• 2.2 组织芯片免疫化学染色
• 2.3 统计学分析
• 3 实验结果
• 3.1 组织芯片的阵列
• 3.2 肝癌和癌旁组织FGF-20表达情况
• 3.3 FGF-20表达与肝癌临床病理生物学指标的关系
• 3.4 肝癌和癌旁组织微血管密度及其与FGF-20表达的关系
• 3.5 肝癌和癌旁组织β-catenin表达及其与FGF-20表达的关系
• 4 讨论
• 4.1 关于组织芯片
• 4.2 FGF-20表达与肝癌生长
• 4.3 FGF-20表达与肝癌血管生成
• 4.4 FGF-20表达与Wnt/β-catenin信号通路
• 5 小结
• 参考文献
• 综述
• 致谢