论文摘要
脂肪沉积包括脂肪细胞体积的增大和数目的增多。脂肪细胞体积的改变主要通过脂肪生成或脂肪溶解作用,脂肪细胞数目的改变包括前脂肪细胞增殖或前体脂肪细胞、脂肪细胞的凋亡或去分化。前体脂肪细胞分化为脂肪细胞的过程中,一系列基因时序表达促使了细胞最终分化成脂肪细胞。脂肪细胞分化及其调控的失常会引起肥胖、糖尿病、心脑血管等一系列的疾病。研究前体脂肪细胞增殖分化和凋亡的机理,通过调控脂肪细胞的体积和数量,可望为有效调控体脂沉积的有效途径。本研究以1-3 d健康长白仔猪为实验动物,以体外培养的前体脂肪细胞为研究对象,采用MTT法、RT-PCR、光学显微镜、油红O染色、油红O染色提取法、吖啶橙荧光染色和流式细胞术等方法,研究了全反式维甲酸（all-trans retinoic acid, ATRA）对猪脂肪细胞增殖、分化和凋亡的影响。得出如下研究结果:1、在不同浓度ATRA作用下,对猪脂肪细胞增殖能力的影响。结果表明,10 nmol/L、100 nmol/L ATRA促进前体脂肪细胞的增殖（p<0.05）,1μmol/L、10μmol/L、25μmol/L ATRA则抑制前体脂肪细胞的增殖（p<0.05）。ATRA对脂肪细胞增殖的作用呈浓度和时间依赖性。2、光学显微镜、油红O染色法观察细胞分化过程中的形态变化,油红O染色提取法定量分析细胞内脂肪生成及细胞分化情况,结果表明,10 nmol/L和100 nmol/L ATRA均能促进脂肪细胞分化（p<0.05）,而1μmol/L、10μmol/L、25μmol/L ATRA则抑制脂肪细胞的分化（p<0.05）。ATRA对猪脂肪细胞分化的作用呈浓度和时间依赖性。3、采用RT-PCR技术分析10 nmol/L、10μmol/L两种浓度ATRA对脂肪细胞分化早期分化标志基因LPL,和特异转录因子PPARγ2、C/EBPα和RARαmRNA表达的影响。结果显示,低浓度（10 nmol/L）ATRA对细胞的分化起明显的促进作用（p<0.05）,下调其受体RARαmRNA的表达但上调LPL、PPARγ2、C/EBPαmRNA的表达;高浓度（10μmol/L）ATRA对细胞的分化起明显的抑制作用（p<0.05）,上调RARαmRNA的表达但下调LPL、PPARγ2、C/EBPαmRNA的表达。提示ATRA可能通过调控RARα、LPL、PPARγ2、C/EBPαmRNA的表达发挥其促进或抑制脂肪细胞分化的生物学功能。4、利用吖啶橙荧光染色法观察不同浓度ATRA对前体脂肪细胞凋亡率的影响,结果表明,10μmol/L、25μmol/L、50μmol/L ATRA可以不同程度的诱导前体脂肪细胞的凋亡;采用流式细胞术和半定量RT-PCR技术分析10μmol/L ATRA不同处理时间对前体脂肪细胞凋亡的诱导作用,结果提示,10μmol/L ATRA可随时间依赖性诱导前体脂肪细胞的凋亡,同时可以下调抗凋亡基因Bcl-2的表达、而上调促凋亡基因Bax的表达。提示ATRA可能通过调控Bcl-2、Bax mRNA的表达发挥其诱导脂肪细胞凋亡的作用。综上所述,不同浓度ATRA对猪前体脂肪细胞增殖分化和凋亡的影响是不同的,以上研究从细胞和分子水平为ATRA调控体脂沉积提供了理论依据。