siRNA沉默PARG基因表达对小鼠结肠癌CT26细胞肝转移影响

论文摘要

目的探讨利用RNA干扰技术沉默PARG基因的表达对小鼠结肠癌CT26细胞肝转移的影响。方法采用侵袭试验和细胞-基质黏附实验，观察PARG基因沉默前后CT26细胞侵袭及基质粘附能力的改变；通过脾脏包膜下注射细胞悬液的方式构建BALB/c小鼠肝转移模型，比较各组脾脏移植瘤、肝脏转移瘤结节及荷瘤小鼠生存期变化；采用Western blot检测PARG、PARP、NF-κB、integrin-β1、MMP-9和MMP-2在CT26细胞及脾脏移植瘤组织中的表达，并用明胶酶谱法分析肿瘤细胞培养上清液中MMP-9和MMP-2活性。结果1.侵袭试验和细胞-基质黏附实验结果显示，与对照组相比，PARG基因沉默后CT26细胞穿过微孔膜的数量明显减少（P<0.05），与FN的粘附率明显降低（P<0.05）。2.成功构建小鼠肝转移模型，脾脏包膜接种14天后，各组脾脏均有移植瘤形成，但PARG基因沉默组脾脏移植瘤的体积与对照组相比均有不同程度的缩小（P<0.05），肝脏转移瘤结节分级也明显低于对照组（P<0.05）。Kaplan-Meier生存曲线显示接种PARG基因沉默CT26细胞的荷瘤小鼠平均生存时间显著延长（P<0.05）。3.Western Blot结果显示，PARG基因沉默CT26细胞integrin-β1、MMP-9和MMP-2的蛋白表达量较对照组明显减少（P<0.05）。同时明胶酶谱法也检测到PARG基因沉默CT26细胞培养上清液中MMP-2和MMP-9的活性也明显被抑制（P<0.05）。4.PARG基因沉默组小鼠脾脏移植瘤组织中PARG、PARP、NF-κB、integrin-β1、MMP-9和MMP-2的蛋白表达量明显低于对照组（P<0.05）。结论1. PARG基因沉默能降低CT26细胞的侵袭及黏附能力，抑制小鼠脾脏移植瘤和肝脏转移瘤结节的形成，其可能在肿瘤细胞的侵袭转移过程中起重要调节作用。2. PARG基因沉默降低CT26细胞侵袭、黏附能力及肝脏转移瘤结节的形成，其机制可能与其降低PARP表达，抑制NF-κB的转录活性进而下调integrin-β1、MMP-9和MMP-2等下游靶基因的表达有关。

论文目录

• 符号说明
• 摘要
• ABSTRACT
• 前言
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.2 实验方法
• 1.3 统计学处理
• 2 结果
• 2.1 PARG基因沉默对CT26细胞-基质黏附能力的影响
• 2.2 PARG基因沉默对CT26细胞侵袭能力的影响
• 2.3 PARG基因沉默对脾脏移植瘤大小和肝脏转移瘤结节分级的影响
• 2.4 PARG基因沉默对荷瘤小鼠生存时间的影响
• 2.5 PARG基因沉默对CT26细胞培养上清液中MMP-9和MMP-2活性的影响
• 2.6 PARG基因沉默对CT26细胞integrin-β1、MMP-9和MMP-2表达的影响
• 2.7 PARG基因沉默对小鼠脾脏移植瘤组织PARG、PARP、NF-κB、integrin-β1、MMP-9和MMP-2表达的影响
• 3 讨论
• 全文小结
• 参考文献
• 附图
• 文献综述
• 参考文献
• 致谢
• 学习期间发表的论文