尼洛替尼、三氧化二砷对耐伊马替尼K562细胞株增殖、凋亡和BCR-ABL基因表达的影响

论文摘要

目的:观察不同浓度的尼洛替尼（AMN107）、三氧化二砷（ATO）、伊马替尼（STI571）及两两者联合对耐伊马替尼K562（K562G）细胞株生长、凋亡和BCR/ABL基因表达的影响,为临床耐伊马替尼慢性粒细胞白血病（CML）治疗提供实验依据。方法:在体外以人耐伊马替尼K562细胞为研究对象,分成对照组和实验组进行细胞培养,对照组不加任何药物,实验组共分6组分别加入不同浓度STI571、ATO、AMN107以及联合用药STI571+ATO、AMN107+ATO、STI571+AMN107。MTT比色法测定药物对K562G细胞生长抑制率的影响,PI单染色法流式细胞仪检测K562G细胞凋亡率,荧光定量PCR检测K562G细胞BCR/ABL融合基因的表达水平。结果: 1.MTT检测实验结果示:（1）耐药浓度范围内STI571对K562G细胞生长无明显抑制作用。（2） ATO对K562G细胞生长有抑制作用,呈剂量依赖性。（3） AMN107对K562G细胞生长有抑制作用,呈剂量依赖性。（4）联合用药STI571+ATO组对K562G细胞生长有抑制作用,呈剂量依赖性,比单用ATO组（除1.0μmol/L外）有显著性差异（P<0.05）。（5）联合用药AMN107+ATO组对K562G细胞生长有明显抑制作用,呈剂量依赖性,各浓度比单用AMN107组或单用ATO组有显著性差异（P<0.05）。（6）联合用药STI571+AMN107组对K562G细胞生长有明显抑制作用,呈剂量依赖性,各浓度组比单用AMN107组有显著性差异（P<0.05）。2.流式细胞术分析各组K562G细胞凋亡率结果显示:对照组细胞凋亡率为:9.86±1.02。（1） STI571（0.25、2.5、10.0μmol/L）组细胞凋亡率为:10.54±1.21、10.62±1.40、11.20±1.81,均无明显细胞凋亡作用。（2） ATO（1.0、5.0、10.0μmol/L）组细胞凋亡率为:19.12±1.10、60.98±2.28、52.28±1.21,其中以5.0μmol/L时细胞凋亡率最高。（3） AMN107（0.25、2.5μ、5.0μmol/L）组细胞凋亡率为:17.54±2.21、30.41±2.22、60.98±2.64,呈剂量依赖性。（4） STI571+ATO[（0.25+1.0）、（2.5+5.0）、（10.0+10.0）μmol/L]组细胞凋亡率为:31.2±1.10、70.98±2.28、62.98±1.21,其中以（5.0+2.5）μmol/L浓度时细胞凋亡率最高,各浓度比单用ATO组有显著性差异（P<0.05）。（5） AMN107+ATO[ （0.25+1.0）、（2.5+5.0）、（5.0+10.0）μmol/L]组细胞凋亡率为:29.5±1.10、86.65±2.28、71.65±1.21,其中以（2.5+5.0）μmol/L浓度时细胞凋亡率最高,各浓度比单用AMN107组或单用ATO组有显著性差异（P<0.05）。（6） AMN107+STI571[（0.25+0.25）、（2.5+2.5）、（5.0+10.0）]μmol/L组细胞凋亡率为:28.37±1.10、59.64±2.28、71.19±1.21,呈剂量依赖性,各浓度比单用AMN107有显著性差异（P<0.05）。3.荧光定量PCR检测K562G细胞BCR/ABL融合基因的表达水平:（1） ATO（1.0、5.0、10.0μmol/L）组BCR/ABL基因表达水平分别为1.18×106拷贝/ml、3.28×104拷贝/ml、5.23×104拷贝/ml。（2） AMN107（0.25、2.5、5.0μmol/L）组BCR/ABL基因表达水平分别为8.13×104拷贝/ml、1.58×103拷贝/ml、阴性。（3） ATO+STI571 [（1.0+0.25）、（5.0+2.5）、（10.0+10.0）μmol/L]组BCR/ABL基因表达水平分别为1.10×105拷贝/ml、5.06×103拷贝/ml、6.43×103拷贝/ml。（4） ATO+AMN107[（1.0+0.25）、（5.0+2.5）、（10.0+10.0）μmol/L]组BCR/ABL基因表达水平分别为2.54×104拷贝/ml、阴性、阴性。（5） AMN107+STI571[ （0.25+0.25）、（2.5+2.5）、（5.0+10.0）μmol/L ]组BCR/ABL基因表达水平分别为3.13×103拷贝/ml、阴性、阴性。结论:1. K562G细胞对10μmol/L及10μmol/L以下的STI571耐药2. ATO能抑制K562G细胞生长,诱导K562G细胞凋亡,细胞抑制率呈剂量依赖性,细胞凋亡以中浓度（5.0μmol/L）时最明显。3. AMN107作能抑制K562G细胞生长,诱导K562G细胞凋亡,细胞抑制率和细胞凋亡率均呈剂量依赖性。4.STI571与ATO联合用药作用于K562G细胞时,细胞抑制率和细胞凋亡率比单用ATO效果好。5. AMN107与ATO联合用药作用于K562G细胞时,细胞抑制率和细胞凋亡率比单用AMN107或ATO效果好,具有协同作用。6.AMN107与STI571联合用药作用于K562G细胞,细胞抑制率和细胞凋亡率比单用AMN107或STI571效果好,具有协同作用。7. AMN107、ATO及联合用药组均能使K562G细胞BCR/ABL基因表达水平下降。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第1章 前言
• 第2章 材料与方法
• 2.1 研究对象
• 2.2 主要试剂和仪器
• 2.2.1 主要试剂
• 2.2.2 实验仪器
• 2.3 实验方法
• 2.3.1 试剂准备
• 2.3.2 细胞培养
• 2.3.3 实验分组
• 2.3.4 MTT 法检测药物对 K562G 细胞生长抑制的影响
• 2.3.5 流式细胞仪检测细胞凋亡
• 2.3.6 荧光定量 PCR 检测 K562G 细胞 BCR/ABL 融合基因的表达水平
• 2.4 统计学分析
• 第3章 结果
• 3.1 MTT 检测不同浓度药物对 K562G 细胞生长抑制的影响
• 3.2 流式细胞仪检测细胞凋亡
• 3.3 荧光定量 PCR 检测 BCR/ABL 融合基因的表达水平
• 第4章 讨论
• 第5章 结论
• 致谢
• 参考文献
• 攻读学位期间的研究成果
• 附带综述