IL-21在系统性红斑狼疮中的表达及作用

论文摘要

目的：分析白介素-21（IL-21）在系统性红斑狼疮（SLE）患者中的表达以及其与SLE疾病活动性的临床相关性,研究其在SLE发病机制中的作用。方法：（1）明确诊断SLE的初治患者36人,同期选取年龄性别匹配的健康对照28人,采集抗凝外周静脉血分离外周血单个核细胞（PBMC）,并留取血清零下20度冻存备用；（2）部分PBMC在RPMI1640完全培养基中与PMA、Ionomycin共培养,刺激胞内细胞因子分泌,并加入Golgiplug阻断细胞因子释放,进行胞内细胞因子IL-21以及膜表面CD4染色,流式细胞仪检测；（3）磁珠分选初治SLE患者CD4+细胞,流式细胞术分选出CD4+CD25+细胞,在RPMI 1640完全培养基中与PMA、Ionomycin共培养,Golgiplug阻断,对IL-21分别与IFN-gamma、IL-4、IL-17及CXCR5进行两两染色,以检测IL-21在各T辅助细胞亚群Th1 （CD4+IFN y+）、 Th2 （CD4+IL4+）、Th17 （CD4+IL17+）、滤泡T辅助细胞Tfh（CD4+CXCR5+）以及调节性T细胞Treg（CD4+CD25+）上的表达；（4）ELISA法检测SLE患者和健康对照血清中IL-21水平；（5）Trizol法提取SLE患者及健康对照外周血PBMC的总RNA, Real-time PCR法检测STAT3 mRNA水平；（6）磁珠分选出健康对照外周血CD19+B细胞,选取初治SLE患者和健康对照者的血清分别与上述CD19+B细胞共培养,加或不加入IL-21受体融合蛋白（IL-21-R-FC）以阻断IL-21信号通路,同时设所选的SLE患者及健康对照者血清单独培养作为对照,5-7d后免疫比浊法测定培养上清中IgG和IgM含量,收获CD19+B细胞行Annex in V+PI染色,流式细胞仪检测CD19+B细胞的凋亡比例；（7）收集患者临床资料,对IL-21的表达与临床指标的相关性进行分析。结果：（1）SLE患者外周血CD4+T细胞上可检测到的IL-21表达水平较健康对照显著增高（P<0.001）,其中重型SLE显著高于轻型SLE（P<0.001）。初治SLE患者血清IL-21水平较健康对照显著增高（P<0.001）,治疗一个月后IL-21水平显著下降（P<0.001）；（2）IL-21水平与血清IgG呈正相关（r=0.585,P<0.001）,与SLEDAI评分（r=0.634,P<0.001）及抗dsDNA滴度（r=0.408,P<0.05）呈正相关与补体C3呈负相关（r=-0.554,P<0.05）；（3）SLE患者的多种T淋巴细胞亚群包括T辅助细胞Th1 （CD4+IFNγ+）、Th2（CD4+IL4+）、Th17（CD4+IL17+）、Tfh（CD4+CXCR5+）以及调节T细胞Treg（CD4+CD25+）中均分泌IL-21；（4）SLE患者外周血PBMC中STAT3 mRNA水平较正常对照组均显著上调（P<0.05；P<0.001）；（5）正常人外周血CD19+B细胞与SLE患者血清共培养（下称：NB+PS）上清IgG和IgM含量显著高于单独SLE血清培养组（下称：PS+Medium）（P<0.05）,而正常人外周血CD19+B细胞与非同源健康对照血清共培养的上清IgG及IgM含量（下称：NB+NS）比与单独健康对照血清培养（NS+Medium）上清无明显改变（P>0.05）；（6） 中和SLE血清中的IL-21可使培养上清的IgG及IgM含量显著减少（P<O.05）；（7）与SLE患者血清共培养组的B细胞的死亡率显著高于与健康对照血清共培养组（P<0.05）,阻断IL-21可使B细胞死亡率显著下降（P<0.05）。结论：（1）IL-21可作为评价SLE病情活动和治疗效果的指标之一；（2）IL-21可诱导B细胞分化为工g分泌细胞,产生抗体；（3）IL-21可能参与诱导正常B细胞凋亡。

论文目录

• 中英文缩写词
• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 第一部分 IL-21在系统性红斑狼疮中的表达与意义
• 实验目的
• 材料与方法
• 实验结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 第二部分 IL-21在系统性红斑狼疮患者中的作用研究
• 实验目的
• 材料与方法
• 实验结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 附录
• 附录1 ACR 1997年的SLE分类标准
• 附录2 系统性红斑狼疮活动性指数记分（SLEDAI score）
• 附录3 SLE病情轻重程度评估
• 综述
• 参考文献
• 致谢