论文题目: 9-硝基喜树碱小肠吸收机理及其自微乳化给药系统的研究
论文类型: 博士论文
论文专业: 药剂学
作者: 沙先谊
导师: 方晓玲
关键词: 硝基喜树碱,外翻肠囊法,小肠转运,细胞,糖蛋白,自微乳化给药系统,分子探针,分子药剂学,紧密连接,药物动力学,生物利用度,体内分布
文献来源: 复旦大学
发表年度: 2005
论文摘要: 9-硝基喜树碱（9-nitrocamptothecin,9-NC）是一种新型的喜树碱水不溶性衍生物,动物实验显示对多种癌细胞具有强抑瘤活性,尤其是对胰腺癌有着独特的疗效。本文旨在研究9-硝基喜树碱的基本理化性质和小肠吸收机理,阐明影响药物口服吸收的因素,从而为制备9-硝基喜树碱的新型口服制剂提供合理依据;制备9-硝基喜树碱自微乳化给药系统,考察影响制剂中药物细胞摄取和转运的因素;研究自微乳化给药系统的分子药剂学性质,并对其体内药动学和组织分布进行了研究。 首先,建立了9-硝基喜树碱内酯和羧酸盐形式的HPLC分析方法,考察药物的基本理化性质和水解动力学。9-硝基喜树碱是一种水难溶性药物,并且随着介质pH的升高,其油水分配系数逐渐降低,说明药物的脂溶性降低。9-NC在水溶液中的水解为假一级动力学反应;在水溶液中受OH-催化,药物的水解是一种pH依赖性的水解反应,在酸性条件下稳定,在中性偏碱性条件下,水解速度加快;药物的水解反应速度与温度成正相关性。在pH为4.5、6.5、7、7.4、8与9.06缓冲液中的反应活化能分别为5.039,12.476,10.094,10.021,9.647,11.35 KJ/mol。 以外翻肠囊法考察了9-硝基喜树碱在肠黏膜的吸收性质。结果表明9-硝基喜树碱在十二指肠、空肠、回肠的吸收没有显著性部位差异性（P>0.05）,均主要以被动扩散的方式吸收。P-糖蛋白抑制剂维拉帕米能显著增加各段小肠对9-NC的吸收（P<0.05）,在小肠下端更加明显。随着维拉帕米浓度的增加,作用逐渐增强,在50μg/ml的维拉帕米作用下,药物90min小肠累积透过量增加了大约2倍。 建立了Caco-2细胞摄取和转运模型,首次考察了9-硝基喜树碱的Caco-2细胞摄取、跨膜转运及外排动力学研究,评价了表面活性剂Cremophor EL、Labrasol和Transcutol P对药物转运的影响。结果表明:（1） 9-硝基喜树碱主要以被动扩散的方式被细胞摄取。药物的摄取与时间呈正相关,与温度、pH呈负相关。P-gp抑制剂环孢菌素和维拉帕米显著增加9-NC细胞摄取（P<0.05）。（2） 9-硝基喜树碱的吸收转运具有pH依赖性,在弱酸性条件下有助于药物的吸收。9-硝基喜树碱主要以被动扩散的方式吸收转运,而药物的分泌具有浓度依赖性和饱和性的非线性动力学特征,其米氏常数Km为49.8±1.2μM,Vmax为38.28±0.8ng/cm2/min。（3） 9-硝基喜树碱在Caco-2细胞中的转运呈现较强的方向性,从Basolateml侧（BL,基底面）到Apical侧（AP,肠腔面）跨膜转运速度大于AP到BL转运（2.6-6.9倍）。当加入P糖蛋白抑制剂环孢菌素和维拉帕米后,增加了药物吸收,同时降低了药物的外排,其表观渗透系数Papp BL-AP/Papp AP-BL的比值从3.4分别降
论文目录:
中文摘要
英文摘要
前言
第一章 9-硝基喜树碱理化性质及水解动力学研究
1 材料与仪器
2 实验方法
3 实验结果
4 讨论
本章研究小节
参考文献
第二章 9-硝基喜树碱小肠吸收机理的研究
第一节 9-硝基喜树碱大鼠离体外翻小肠吸收研究
1 材料与仪器
2 实验方法
2.1 外翻肠囊实验方法
2.2 9-NC小肠吸收样品色谱分析方法的建立
2.3 肠细胞活性的评价
3 实验结果
3.1 9-NC小肠吸收样品测定方法的确证
3.2 9-NC在大鼠各小肠段的吸收性质
3.3 P-gp抑制剂维拉帕米对9-NC小肠吸收的影响
4 讨论
第二节 Caco-2细胞模型的建立与验证
1 材料与仪器
2 实验方法
2.1 Caco-2细胞模型的建立
2.2 Caco-2细胞模型的验证
3 实验结果
3.1 光学显微镜和电镜观察
3.2 甘露醇通透性实验
3.3 TEER值
4 讨论
第三节 9-硝基喜树碱Caco-2细胞模型中的摄取、转运和外排动力学研究
1 材料与仪器
2 实验方法
2.1 9-硝基喜树碱测定方法的建立和确证
2.2 9-NC供试溶液的配制
2.3 细胞培养条件
2.4 Caco-2细胞模型对9-NC的摄取试验方案
2.5 9-NC细胞转运试验方案
2.6 TEER值的测定
2.7 细胞双向外排动力学
2.8 数据分析
3 实验结果
3.1 样品中9-NC含量高效液相分析方法的建立
3.2 9-NC细胞摄取结果
3.3 9-NC的细胞转运试验结果
3.4 9-NC双向外排动力学结果
4 讨论
本章研究小结
参考文献
第三章 9-硝基喜树碱自微乳化给药系统的研究
第一节 微乳相图的基础研究
1 材料与仪器
2 实验方法
3 结果与讨论
3.1 9-NC在不同油、表面活性剂和助表面活性剂中的溶解度
3.2 处方因素对微乳形成的影响
3.3 稀释介质对微乳形成的影响
第二节 星点设计—效应面法优化9—硝基喜树碱自微乳化给药系统
1 材料与仪器
2 实验方法
3 结果与讨论
小节
第三节 9-NC自微乳化给药系统物理药剂学性质和初步稳定性研究
1 实验方法
2 结果与讨论
本章研究小结
参考文献
第四章 9-硝基喜树碱自微乳化给药系统的细胞摄取与转运研究
1 材料与仪器
2 实验方法
2.1 9-NC制剂的制备
2.2 细胞培养条件
2.3 跨膜电阻的测定
2.4 细胞摄取、转运样品的测定
2.5 Caco-2细胞模型对9-NC SMEDDS的摄取试验
2.6 9-NC制剂的细胞转运试验方案
2.7 数据分析
3 实验结果
3.1 9-NC自微乳化制剂对TEER值的影响
3.2 细胞摄取结果
3.3 9-NC制剂细胞转运试验结果
4 讨论
本章研究小结
参考文献
第五章 自微乳化给药系统的分子药剂学性质研究
1 材料与仪器
2 实验方法
2.1 Caco-2细胞培养
2.2 空白自微乳化制剂的制备
2.3 跨膜电阻的测定
2.4 ~3H甘露醇通透性的测定
2.5 细胞膜流动性的测定
2.6 自微乳化制剂对细胞内RH-123蓄积量的影响
2.7 免疫荧光法检测ZO-1蛋白、Actin与P-gp
2.8 ZO-1蛋白的SDS-PAGE和Western-blotting分析
2.9 细胞毒性评价
3 实验结果
3.1 自微乳化制剂物理化学特征
3.2 自微乳化制剂对细胞单分子层TEER值的影响
3.3 ~3H甘露醇通透性的测定
3.4 自微乳化制剂对细胞单分子层完整性影响的可逆性
3.5 自微乳化制剂和表面活性剂对细胞膜流动性的影响
3.6 自微乳化制剂对P-gp作用底物RH-123细胞蓄积性的影响
3.7 自微乳化制剂对细胞骨架肌动蛋白(Actin)的影响
3.8 自微乳化制剂对细胞紧密连接蛋白ZO-1蛋白的影响
3.9 自微乳化制剂对P-gp的影响
3.10 细胞膜ZO-1蛋白的SDS-PAGE和Western-blotting分析
3.11 细胞毒性评价
4 讨论
本章研究小结
参考文献
第六章 9-硝基喜树碱自微乳化给药系统体内药动学及其组织分布研究
第一节 9-硝基喜树碱自微乳化给药系统的体内药动学研究
1 材料与仪器
2 实验方法
2.1 9-NC血浆样品高效液相色谱分析方法的建立
2.2 制剂制备方法
2.3 给药方案与样品采集
2.4 数据分析
3 实验结果
3.1 9-NC体内血浆样品分析方法的确证
3.2 9-NC制剂口服给药后大鼠体内药动学
3.3 各制剂组相关数据比较
4 讨论
第二节 9-硝基喜树碱自微乳化给药系统的体内组织分布研究
1 材料与仪器
2 实验方法
2.1 9-NC组织样品高效液相色谱分析方法的建立
2.2 组织分布研究
3 实验结果
3.1 9-NC组织样品分析方法的确证
3.2 剂型对9-NC在小鼠体内分布的影响
4 讨论
本章研究小结
参考文献
全文结论
综述
攻读博士期间发表论文情况
致谢
附录
论文独创性声明
发布时间: 2005-09-19
参考文献
- [1].甲氧基喜树碱的药代动力学研究[D]. 郑健.东北林业大学2013
- [2].聚轮烷—喜树碱偶联物（前体药物）给药系统的研究[D]. 赖春丽.南方医科大学2010
- [3].嘌呤衍生物及环磷酯前体药物的合成和生物活性研究[D]. 刘红霞.中国海洋大学2012
- [4].基于喜树碱的结构改造[D]. 王磊.华东师范大学2016
- [5].吲哚酮类及苯并咪唑类抗肿瘤化合物的研究[D]. 肖锋.华东师范大学2009
相关论文
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- [2].羟基喜树碱隐形纳米囊泡肿瘤靶向研究[D]. 施斌.复旦大学2005
- [3].基于逆转肿瘤多药耐药性的共聚物胶束给药体系的研究[D]. 韩丽妹.复旦大学2006
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