论文摘要
目的：研究兔椎间盘退变中核因子kappaB （NF-κB, Nucleus factor-Kappa B）和环氧化酶2 （COX-2, Cyclooxygenase-2）的表达及意义。方法：1.建立兔椎间盘退变模型：随机抽取日本大耳兔30只,选每只兔子的L3-4、L4-5、L5-6椎间盘为造模组,L1-2、L2-3、L6-7椎间盘为自身对照组,利用定型号和深度的穿刺针,直接穿刺损伤纤维环全层的方法,建立兔椎间盘退变动物模型。分别于术后4周、8周、12周对兔腰椎进行X线及MRI检查,并在相应时间点处死兔子,取出椎间盘进行肉眼观察及HE切片观察；以确定椎间盘退变模型的建立。3. NF-κB及COX-2的检测：用免疫组织化学方法检测椎间盘组织中NF-κB及COX-2的表达,并用Western blotting方法检测椎间盘软骨终板中NF-κB的表达。4.统计分析：应用Image pro plus6.0图象分析软件分析NF-κB及COX-2的免疫组化切片；并用Quantity one软件分析NF-κB的Western blotting条带,所得各数据经SPSS 11.5统计学软件进行统计学分析。结果：1.与对照组椎间盘相比,造模组椎间盘X线检查,术后8周、12周时,见造模椎间盘椎间盘高度丢失,软骨终板钙化,邻近椎体前缘骨赘增生,尤以术后12周明显；MRI检查,术后8周、12周时,见造模椎间盘髓核含水量下降,信号减低,尤以术后12周信号降低明显；组织切片观察见术后4周到12周,造模组椎间盘纤维环排列紊乱进行性加重,髓核细胞进行性减少,细胞外基质降解,纤维环、髓核界限不清。2.标本免疫组化图像显示：①NF-κB在对照组和造模组椎间盘软骨终板及髓核组织的细胞中均有表达,且在术后4周及8周,造模组椎间盘NF-κB的表达明显高于对照组,以术后4周的表达最高,随着退变的加重,造模组椎间盘组织细胞中NF-κB的表达呈下降的趋势。②COX-2在对照组和造模组椎间盘软骨终板的软骨细胞中表达,而纤维环和髓核的细胞中未见表达,在术后4周及8周,造模组椎间盘COX-2的表达明显高于对照组,以术后4周的表达最高,随着退变的加重,COX-2的表达呈下降趋势。3. Western blotting图像显示：对照组和造模组兔椎间盘软骨终板中均有NF-κB表达；术后4周及8周,造模组软骨终板中NF-κB的表达明显高于对照组,以术后4周的表达最高；随着退变的加重,造模组椎间盘软骨终板中NF-κB的表达呈下降趋势。结论：1.采用针刺纤维环全层的方法可成功建立兔椎间盘退变的动物模型。2.在椎间盘退变早期,NF-κB可能上调椎间盘细胞内多种炎性细胞因子的表达及启动细胞凋亡程序,导致椎间盘的炎症反应及椎间盘细胞的凋亡,引起椎间盘的退变。3.在椎间盘退变早期,COX-2可能上调椎间盘细胞PGE2的表达,参与椎间盘的炎症反应,引起椎间盘退变；也可能上调VEGF的表达,诱导新生血管的生成,参与椎间盘损伤后的修复过程。4. NF-κB信号通路可上调椎间盘细胞中COX-2的表达,但NF-κB对COX-2表达的上调需要其他细胞因子的参与,单纯NF-κB的激活不能导致COX-2表达的上调。